本試劑盒只能用于科學(xué)研究,，不得用于醫(yī)學(xué)診斷

南方菜豆花葉病毒（SBMV）ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被南方菜豆花葉病毒（SBMV）抗體的包被微孔中,，依次加入標本,、標準品、HRP標記的檢測抗原,，經(jīng)過溫育并徹-底洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標本中南方菜豆花葉病毒（SBMV）的存在與否,。

樣品收集、處理及保存方法

1.  樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,，因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑,。

2.  標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行。

3. 植物取液或其它相關(guān)樣本：請1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測,。

4.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,，這屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶完-全溶解后再使用,。

2.  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。

3.  預(yù)處理后的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋以達到試劑盒的的最佳檢測效果,。

4.嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作,。

5.所有液體組分使用前充分搖勻,。

試劑盒組成

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min,，洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL,；空白孔不加。

 除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

1.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

2.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

3.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

結(jié)果判斷

1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；

               陰性對照孔OD值平均值≤0.15,。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off）,，樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

試劑盒性能

1. 準確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00,；陰性對照孔OD值平均值≤0.15,，說明試驗結(jié)果有效。

2. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。

3. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%。

4. 貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。

5. 有效期：6個月

免責(zé)聲明

 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗,，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實驗者承擔(dān)，本公司概不負責(zé),。

 嚴格按照說明書操作,，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān),。