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生化試劑試驗(yàn)步驟有哪些 :
1,、貼壁細(xì)胞用yí酶消化,,離心收集。
2,、細(xì)胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次,,離心收集。試驗(yàn)步驟2再重新作一邊,。
3,、加入5mlDNA提取緩沖液,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混勻,。
4,、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達(dá)到100ug/ml,混勻,50℃水浴3h,
5,、用等體積的酚抽提一次,,2500rpm離心收集水相,用等體積的(酚,,異戊醇)混合物抽提一次,,2500r/min離心收集水相
6、用等體積的,,異戊醇抽提一次,。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻,冰浴,,10min.,。
7、2500rpm離心10min.轉(zhuǎn)上清于一離心管中,。加入等體積的異丙醇,。室溫10min,。2500rpm,離心10min。棄上清,。
8,、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉(PH5.2)與2倍體積-20℃預(yù)冷無水乙醇。-20℃20min,。
9,、12000r/min,室溫離心5min。棄上清,。將DNA溶于適量TE中,。
(以上實(shí)驗(yàn)步驟可供各位老師參考.)
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