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初級(jí)會(huì)員 | 第4年

19121610072

生化試劑試驗(yàn)步驟

時(shí)間:2024/9/4閱讀:329
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生化試劑試驗(yàn)步驟有哪些 :


1,、貼壁細(xì)胞用yí酶消化,,離心收集,。


2,、細(xì)胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次,離心收集,。試驗(yàn)步驟2再重新作一邊,。


3、加入5mlDNA提取緩沖液,,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混勻,。


4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達(dá)到100ug/ml,混勻,,50℃水浴3h,


5,、用等體積的酚抽提一次,2500rpm離心收集水相,,用等體積的(酚,,異戊醇)混合物抽提一次,2500r/min離心收集水相


6、用等體積的,,異戊醇抽提一次,。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻,冰浴,,10min.,。


7、2500rpm離心10min.轉(zhuǎn)上清于一離心管中,。加入等體積的異丙醇,。室溫10min。2500rpm,離心10min,。棄上清,。


8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉(PH5.2)與2倍體積-20℃預(yù)冷無(wú)水乙醇,。-20℃20min,。


9、12000r/min,室溫離心5min,。棄上清,。將DNA溶于適量TE中。


(以上實(shí)驗(yàn)步驟可供各位老師參考.)



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