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聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(Polymerase chain raction ,PCR)是一種在體外擴(kuò)增特定DNA片段的方法,,具有特異,、敏感,、產(chǎn)率高,、快速,、簡(jiǎn)便,、重復(fù)性好,、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn),,可用很短時(shí)間使目的基因或某一片段擴(kuò)增十萬(wàn)乃至幾百萬(wàn)倍。PCR反應(yīng)基本步驟:
1,、變性:根據(jù)DNA高溫變性的原理,,將反應(yīng)體系溫度升至變性溫度(高于模板熔點(diǎn),約95℃),,使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板(單鏈),。[95℃,30s]
2,、退火:將反應(yīng)體系溫度驟降至退火溫度(低于引物熔點(diǎn)約55℃),,是PCR引物與PCR模板3’端雜交,,稱為退火。[55~65℃,,30s]
3,、延伸:將反應(yīng)體系溫度升至延伸溫度(約72℃),DNA聚合酶按照堿基配對(duì)原則在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互補(bǔ)鏈,,使目的DNA拷貝數(shù)增加1倍,。[72℃,30~60s]
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