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PCR反應詳細基本步驟

時間:2024/6/20閱讀:557
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聚合酶鏈反應技術(Polymerase chain raction ,PCR)是一種在體外擴增特定DNA片段的方法,,具有特異,、敏感,、產率高,、快速,、簡便,、重復性好、易自動化等突出優(yōu)點,,可用很短時間使目的基因或某一片段擴增十萬乃至幾百萬倍,。PCR反應基本步驟:


1、變性:根據DNA高溫變性的原理,將反應體系溫度升至變性溫度(高于模板熔點,,約95℃),,使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板(單鏈)。[95℃,,30s]


2,、退火:將反應體系溫度驟降至退火溫度(低于引物熔點約55℃),是PCR引物與PCR模板3’端雜交,,稱為退火。[55~65℃,,30s]


3,、延伸:將反應體系溫度升至延伸溫度(約72℃),DNA聚合酶按照堿基配對原則在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互補鏈,,使目的DNA拷貝數(shù)增加1倍,。[72℃,30~60s]


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