ELISA技術(shù)自20 世紀70年代初問世以來，發(fā)展非常迅速,，目前被廣泛應用于免疫學,、醫(yī)學、生物學等許多領(lǐng)域,。其基本原理是根據(jù)抗原或抗體能在一定條件下結(jié)合到固相載體的表面仍保持其免疫活性,，抗原或抗體與酶結(jié)合形成的結(jié)合物仍能保持免疫學和酶的活性。結(jié)合物與相應的抗原,、抗體結(jié)合后,，可根據(jù)加入相應的酶底物的顏色反應來判斷有無相應的免疫反應，而且顏色的深淺與相應的抗原或抗體的量在一定的范圍內(nèi)成正比,。由于抗原,、抗體的反應在1 種固相載體——聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后,，可通過洗滌除去多余的游離反應物,，從而保證實驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。了解實驗原理后同時也必須做好實驗的前期準備,。一,、儀器準備：

酶標儀（ELISA Reader），微量可調(diào)加樣器1套（10,、20,、100、200,、1000 μL）,，恒溫培養(yǎng)箱，pH 計,，沖洗器,，洗滌瓶，康氏管,，50 mL燒杯,，吸管。96孔酶標板或48孔酶標板,。

二,、試劑準備：

1. 包被液：0.05 M pH9.6碳酸鹽緩沖液（Na2CO3 1.59 g, NaHCO3 2.93 g, 加水至1000 mL，4℃可保存1周）,。

2. 封閉液：5％ 脫脂奶粉或0.3％ BSA

3. 洗滌液：0.15 M pH7.4 PBS-T（0.2 g KH2PO4,2.9 g Na2HPO4?12H2O,8 g NaCl, 0.2 g NCl,0.5mL Tween-20,加水至1000 mL,，4℃保存）

4. 底物液：pH5.0 的磷酸鹽-檸檬酸緩沖液（0.1 M 檸檬酸24.3 mL,，0.2 M磷酸鹽25.7 mL，加水50 mL,，混勻）,，臨用前，在上述緩沖液中溶解40 毫克鄰苯二胺（Ortho-Phenglendiaruine, OPD）,，然后加入30%雙氧水0.15 毫升,，底物對光敏感，需要避光并立即使用,。

5. 陽性對照液：1：100用HAT培養(yǎng)基稀釋的小鼠血清,。陰性對照液為HAT培養(yǎng)基

6. 辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG 酶標結(jié)合物。

7. 2 M H2SO4

8. 抗原溶液