◆細胞為什么會衰老：

1,、過量的大分子交聯(lián)是衰老的一個主要因素，如DNA交聯(lián)和膠原膠聯(lián)均可損害其功能,，引起衰老,。

2、細胞代謝產(chǎn)物積累至—定量后會危害細胞,，導致細胞的衰老,。

3、自由基含有未配對電子,，具有高度反應活性,，可引發(fā)鏈式自由基反應，引起DNA,、蛋白質(zhì)和脂類,，尤其是多不飽和脂肪酸等大分子物質(zhì)變性和交聯(lián)，損傷DNA,、生物膜和重要的結構蛋白和功能蛋白,，從而引起衰老各種現(xiàn)象的發(fā)生。

4,、存在于細胞內(nèi)部提供能量的線粒體,，其遺傳基因很容易發(fā)生突變,，變異的積累很可能是人體老化的原因之—。

細胞衰老是細胞在正常環(huán)境條件下發(fā)生的功能減退,、逐漸趨向死亡的現(xiàn)象,。怎么可以檢測出來細胞衰老呢？按照以下檢測方法步驟操作可以檢測出細胞衰老：

◆細胞衰老檢測方法與步驟：

（1）細胞接種前在6孔培養(yǎng)板中預先放置滅菌的細胞片,，每孔加入1×10E5個細胞,，37℃ 5% CO2條件下培養(yǎng)過夜，使細胞在細胞片上生長,。

（2）在超凈工作臺中吸棄6孔培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液,，加入×1 PBS，洗滌細胞1次,，隨后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液,，室溫條件下固定3~5分鐘。

（3）吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液,，加入×1 PBS,，洗滌細胞3次，每次3分鐘,。

（4）吸棄×1 PBS,，加X-Gal溶液以浸沒細胞片為宜，37℃孵育4~8小時或過夜,，用保鮮膜包被6孔培養(yǎng)板以防染液蒸發(fā),。

（5）取出細胞爬片，去離子水沖洗2次,，再次用固定液固定4分鐘,，流水輕輕沖洗。

（6）將細胞爬片按此順序脫水,、透明∶95%酒精I（2分鐘）→95%酒精Ⅱ（2分鐘）→100%酒精I（2分鐘）→100%酒精I（5分鐘）→二甲苯I（2分鐘）→二甲苯Ⅱ（2分鐘）,。

（7）中性樹膠封片。

（8）在普通光學顯微鏡下觀察衰老細胞形態(tài),。

每張片子鏡下計數(shù)400個細胞,，確定X-Gal染色陽性細胞（衰老細胞）在細胞群體中的所占的百分比即衰老細胞率（藍染細胞數(shù)/總計細胞數(shù)×100%）。

◆細胞衰老檢測注意事項：

①X-Gal溶液需要現(xiàn)用現(xiàn)配,。

②細胞固定時間過長或固定之后清洗不干凈，均會影響后續(xù)的酶反應,。