ELISA實(shí)驗(yàn)加樣時通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周圍，導(dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸,，使孔內(nèi)反應(yīng)不均一。很多說明書,、教科書上也都提到,，加樣時要避免出現(xiàn)氣泡，這到底是什么原因呢,？因?yàn)樵谧鰧?shí)驗(yàn)的過程中,，有時為了打干凈槍頭里面的液體，很容易產(chǎn)生氣泡,，是不是這樣對實(shí)驗(yàn)結(jié)果會后什么影響?

原因：

1.通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周圍,，導(dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸，使孔內(nèi)反應(yīng)不均一,。

2.包被時有氣泡的話,，將導(dǎo)致包被不完-全實(shí)際包被里下降―–弱陽性甚至假陰性。

3.封閉時有氣泡的話,，將導(dǎo)致大里未結(jié)合位點(diǎn)的存在,，引起非特異性結(jié)合-–本底增高，假陽性,。

4.加樣時有氣泡的話,，抗原抗體不能有效的結(jié)合––弱陽性甚至假陰性。

5.加二抗時有氣泡的話,，抗原抗體不能有效的結(jié)合––弱陽性甚至假陰性（競爭法相反-—–一假陽性>,。

6.加顯色液時有氣泡的話-—–顯色不完-全。

7.加終止液時有氣泡的話（1,、不能完-全終止反應(yīng)2,、影響酶標(biāo)儀比色，OD值增高)

8.洗滌時有氣泡的話,，非特異性結(jié)合物不能完-全洗去,，做無用功。

注意事項(xiàng)：

精準(zhǔn)的儀器和準(zhǔn)確的操作是保證ELISA結(jié)果準(zhǔn)確關(guān)鍵,，怎樣的加樣方式才是正確呢?ELISA實(shí)驗(yàn)中一般有5次加樣,，即加標(biāo)本、加檢測抗體,、加酶結(jié)合物和加顯色底物及終止液,。

1.實(shí)驗(yàn)室使用的微量加樣器應(yīng)注意保養(yǎng)并定期校正。ELISA比較敏感,，每孔加入液體量誤差會導(dǎo)致結(jié)果讀數(shù)差別,，因此避免儀器帶來誤差,。

2.加樣前，溶液充分混勻,，垂直懸空加入液體,，避免加在孔壁上，不可產(chǎn)生氣泡,。

3.加樣時避免液體濺出,，如有樣本濺出，應(yīng)用吸水紙輕輕拭干,，并做相應(yīng)記錄,。

4.如果加樣槍漏氣以至于加樣的量不夠，不能用槍吸出再加,，做相應(yīng)記錄實(shí)驗(yàn),。

5.每次加樣順序一致，尤其底物,、終止液順序一致，保證每個孔顯色時間相同,。