一,、標(biāo)準(zhǔn)品的制備

　　標(biāo)準(zhǔn)品的制備是非常復(fù)雜的問(wèn)題,，也是標(biāo)記免疫分析中比較難于制備的一個(gè)成分,。以下討論的是實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)品(或商品化試劑中標(biāo)準(zhǔn)品)的制備,。

　?。?）基質(zhì)的制備：如前所述,，作為標(biāo)準(zhǔn)品的介質(zhì)(基質(zhì))成分應(yīng)與被測(cè)樣品相同。對(duì)大多數(shù)用于測(cè)定血清中某物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品,，應(yīng)用不含被測(cè)物質(zhì)的零血清制備,，以求反應(yīng)的介質(zhì)環(huán)境相當(dāng)。但有時(shí)零值血清的制備十分困難,，所以有些標(biāo)準(zhǔn)品用適當(dāng)?shù)木彌_液制備,，并在緩沖液中加入一定量的載體蛋白(一般用1%～2%的牛血清白蛋白)，以便使其與樣品的介質(zhì)環(huán)境相近,。

　　零值血清的制備方法有：

　　A,、吸附法：血清中小分子物質(zhì)如三碘甲狀腺原氨酸 (T3)、甲狀腺素(T4)等,，可用活性炭吸附去除,。這種方法簡(jiǎn)便，但待測(cè)物質(zhì)難以清除干凈,，而且大分子活性物質(zhì)不能用此法進(jìn)行制備,。

　　B、反復(fù)凍融法：對(duì)大分子活性物質(zhì)可選用低值血清,，經(jīng)反復(fù)凍融使被測(cè)物質(zhì)失活,。用這種方法可使某些蛋白類(lèi)激素大部分失活，但也難以得到真正的零值血清,。

　　C,、親和層析法：用特異性抗體制備親和層析柱，用以吸附被測(cè)抗原,。用這種方法可以得到高質(zhì)量的零值血清,，但本法比較復(fù)雜而且成本也高。

　?。?）標(biāo)準(zhǔn)物純品的選擇：應(yīng)選擇高化學(xué)純和高免疫純的純品作標(biāo)準(zhǔn)品,。其中免疫純尤為重要,，在標(biāo)準(zhǔn)品中不應(yīng)含有與被測(cè)物質(zhì)有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。

　?。?）標(biāo)準(zhǔn)品的制備：先用零值血清配置高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,，然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的要求，用零值血清將高值血清稀釋至應(yīng)有的濃度,，制成符合預(yù)定要求的,，由不同濃度組成的系列標(biāo)準(zhǔn)品。

　　二,、標(biāo)準(zhǔn)品的鑒定

　?。?）免疫活性的鑒定：選用高特異性的抗血清分別作公ren標(biāo)準(zhǔn)品(如WHO的國(guó)際參考品或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品)的待鑒定標(biāo)準(zhǔn)品的劑量反應(yīng)曲線，并觀察兩條曲線的平行性,。如兩條劑量反應(yīng)曲線平行,，說(shuō)明兩種物質(zhì)對(duì)同一抗體有相同的親和力，即二者是同質(zhì)性物質(zhì),。如兩條劑量反應(yīng)曲線不平行,，說(shuō)明兩種物質(zhì)具有異質(zhì)性，因而這一待鑒定的標(biāo)準(zhǔn)品是不能使用的,。

　?。?）濃度的標(biāo)定：用已鑒定過(guò)的，免疫活性合格的標(biāo)準(zhǔn)品,，與公ren的標(biāo)準(zhǔn)品作濃度相同的劑量反應(yīng)曲線,。此時(shí)，兩條劑量反應(yīng)曲線應(yīng)該是基本重合的,。如果兩者平行但不重合,，則取兩條劑量反應(yīng)曲線的50%結(jié)合處的相應(yīng)劑量( ED50 )計(jì)算二者的換算系數(shù)，然后調(diào)整待鑒定標(biāo)準(zhǔn)品的濃度,，直至使兩條劑量反應(yīng)曲線wan全或基本重合為止,。

　　三、標(biāo)準(zhǔn)品的計(jì)量

　　許多小分子抗原或半抗原已能得到純品或進(jìn)行合成,，它們對(duì)作為標(biāo)準(zhǔn)品的要求可以得到基本的滿(mǎn)足,，其計(jì)量多直接用單位體積中的重量表示，如mg / ml,、ng / ml 、pg / ml等,。最近WHO推薦用質(zhì)量單位取代重量單位,，即mol / L、mmol / L,、或nmol / L等,。對(duì)大分子的活性物質(zhì)則比較復(fù)雜,。由于得不到絕對(duì)的純品，故很難直接用單位體積中的重量或單位體積中的質(zhì)量計(jì)量,。因此,，常用該物質(zhì)的生物活性單位表示，如IU / L,、mIU / L等,。