一,、操作步驟：

1,、在37℃ 5% CO2條件下將細胞加在處理的載玻片上，用培育基培育,，時間通過預(yù)試驗確定,；

2、細胞長好后,，用洗刷液洗2分鐘×3次,，室溫下將其放入細胞固定液中固定30-60min，蒸餾水洗刷；

3,、室溫下用洗刷液充沛洗刷固定細胞,，（干燥后-20℃冰凍保存2周以上）

4、雜交前將固定的細胞進行如下處理,；順次在70%,，90%，100%的乙醇中浸泡,，脫水每次5min，用二jia苯洗刷,，除掉殘留脂質(zhì)順次在100%,，90%，70%乙醇中浸泡,，進行再水化,，每次5min，后浸泡于洗刷液中,；

5,、在37℃用胃蛋白酶溶液10min處理固定的細胞，以增加細胞對大分子試劑的通透性,，再用洗刷液洗5min,；

6、用1%甲醛固定10min,，用洗刷液洗凈,。

二、留意：  
1,、所有溶液都必須用RNA酶抑制劑處理,。

2、操作中重要的是及時固定,，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,，以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外,，過度固定對原位雜交有明顯的不利影響,。