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當(dāng)前位置:上海佰利萊生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>BCA蛋白濃度測定試劑盒檢測蛋白濃度的原理及特點(diǎn)
BCA 蛋白濃度測定試劑盒原理:
BCA(bicinchoninic acid)法蛋白濃度定量試劑盒是在常用的蛋白濃度檢測方法之一BCA法基礎(chǔ)上改進(jìn)而成,。眾所周zhi,,二價銅離子在堿性的條件下,,可以被蛋白質(zhì)還原成一價銅離子(biuret reaction),,一價銅離子和du特的BCA Solution A(含有BCA)相互作用產(chǎn)生敏感的顏色反應(yīng),。兩分子的BCA螯合一個銅離子,,形成紫色的反應(yīng)復(fù)合物,。該水溶性的復(fù)合物在562nm處顯示強(qiáng)烈的吸光性,吸光度和蛋白濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,,因此根據(jù)吸光值可以推算出蛋白濃度,。
BCA 蛋白濃度測定試劑盒的特點(diǎn):
1.步驟簡單,,45分鐘內(nèi)完成測定,比經(jīng)典的Lowry法快4倍而且更加方便,。
2.靈敏度高,,檢測濃度下限達(dá)到25μg/ml,最小檢測蛋白量達(dá)到0.5μg,,待測樣品體積為1-20μl ,。
3.BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的去污劑等化學(xué)物質(zhì)的影響,可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS,,5%的Triton X-100,,5%的Tween-20, 60, 80。
4.在20-2000μg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,。
5. 檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)法蛋白定量,。
注意事項:
1.長期不用時,Cu試劑與PBS稀釋液可置于2-8℃保存,,如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染則應(yīng)丟棄,。BCA試劑在低溫條件下出現(xiàn)結(jié)晶沉淀時,可37℃溫育使其wan全溶解, 不影響使用,。
2.樣品中若含有較多干擾物質(zhì)時,,請采用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。
3.為了您的安全和健康,,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
4. 常用濃度的去垢劑SDS,Triton X-100,,Tween不影響檢測結(jié)果,,但受螯合劑(EDTA, EGTA)、還原劑(DTT,,巰基乙醇)和脂類的影響,。實(shí)驗(yàn)中,若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,,可試用考馬斯亮藍(lán)(Bradford)蛋白濃度測定試劑盒,。
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