細胞描述

此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤,。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性,。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒,，XC斑點形成試驗陰性?？梢园嬛行约t并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖,。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞,。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用,。

細胞特性

1） 來源：鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞,；巨噬細胞

2） 形態(tài)：不規(guī)則圓形,，紡錘狀，貼壁細胞,，少量懸浮,。

3） 含量：>1x10⁶  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

細胞接收后的處理：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù),。

3）半貼細胞或貼壁不牢（懸?。┘毎?/span>T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況,，若細胞密度在60%以下,，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用*培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代,，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收,。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。  

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺，0.11g / L丙酮酸鈉) (推薦iCell-0001)培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %,；P/S青霉素-鏈霉素 1%。

2） 注意事項：

（a）在細胞生長的初始階段,，細胞以貼壁的形式生長并呈現(xiàn)出長方體的形態(tài)和有“偽足"延伸,。隨著培養(yǎng)時間的增加，細胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長,。細胞密度達到一定的程度,，會有細胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中，鏡下觀察會發(fā)現(xiàn)懸浮和貼壁的細胞會同時出現(xiàn),。（b）該細胞傳代時不需要用胰酶消化,。傳代時，用無菌細胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細胞刮落,，收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中,。（c）該細胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時,，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起,，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的,，在傳代時應收集起

來,，離心后細胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng),。（d）血清質(zhì)量差異可能引起細胞貼壁能力變化,，應選用高質(zhì)量的胎牛血清,。

1） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

2） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細胞處理：

1）凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，*培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

該細胞用細胞刮鏟替代胰酶來對細胞進行處理,。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養(yǎng)表面將細胞刮落,，收集細胞后離心去上清，重懸后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶內(nèi),。收貨后第一次傳代1:2進行,，后續(xù)可以根據(jù)實際的情況以1:2~1:4的比例進行傳代。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。下面T25瓶為例,；

1. 1，細胞用細胞刮鏟替代胰酶來對細胞進行處理,。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養(yǎng)表面將細胞刮落,，收集細胞。

2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清,。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,，標注好名稱,、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過夜,，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。

注意事項：

 1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏,，并會慢慢充滿液氮。解凍時,，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。