實驗記錄手冊|細胞培養(yǎng)實驗的離心機選擇
細胞培養(yǎng)(cell culture)是指在體外模擬體內環(huán)境(無菌,、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等),,使之生存,、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法,。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術,,在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術。不論對于整個生物工程技術,,還是其中之一的生物克隆技術來說,,細胞培養(yǎng)都是一個*的過程,細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)??寺?。細胞培養(yǎng)技術可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞,這是克隆技術*的環(huán)節(jié),,而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆,。細胞培養(yǎng)技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術,,通過細胞培養(yǎng)既可以獲得大量細胞,又可以借此研究細胞的信號轉導,、細胞的合成代謝,、細胞的生長增殖等。
細胞培養(yǎng)實驗室組建的基本要求:
1,、細胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術,,要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。
2,、細胞培養(yǎng)室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響,,要求工作環(huán)境清潔、空氣清新,,干燥和無煙塵,。
3、細胞培養(yǎng)室的設計原則一般是無菌操作區(qū)設在室內較少走動的內側,,常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室,,為10萬級潔凈環(huán)境的潔凈室。而洗刷消毒工作設在潔凈室外,,避免物品污染潔凈室內環(huán)境,。細胞潔凈室需要一個空調系統(tǒng)并對外界保持一定的正壓。
4,、解剖實驗室主要用于對器官組織的分離,,需要有無菌操作臺、解剖顯微鏡,、各種手術器材等,。
組織細胞培養(yǎng)室除一般實驗室的普通常規(guī)設備外,尚有一些特殊需要的設備,?;究煞譃閮纱箢悾?/span>
I. 細胞培養(yǎng)實驗室常用的基本儀器設備
1.顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設備之一,便于掌握細胞的生長情況并觀察有無污染等,。
2.培養(yǎng)箱:體外培養(yǎng)的細胞和體內細胞一樣,,需要在恒定的溫度下生存,大多數(shù)情況下,,適溫度是37℃,,溫差變化一般不應超過±0.5℃,細胞在溫度升高2℃ 時,,持續(xù)數(shù)小時即不能耐受,,40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱,,如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱,。
3.干燥箱:用于細胞培養(yǎng)箱的有些器械,、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒,。
4.水純化裝置:細胞培養(yǎng)對水的質量要求較高,,細胞培養(yǎng)以及與細胞培養(yǎng)工作相關的液體的配制用水必須事先嚴格純化處理。進行細胞培養(yǎng)時配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水:即使是用于玻璃器皿的沖洗,,也應使用二次以上蒸餾水,。
5.冰箱:細胞培養(yǎng)室必須配備。
a,、普通冰箱或冷藏柜——儲存培養(yǎng)液,、生理鹽水等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標本。
b,、低溫冰箱(-20℃)——用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時期存放的制劑,,如酶、血清等,。
6.細胞冷凍儲存器:儲存器常用的是液氮容器,。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購置液氮容器時要綜合考慮容積大小,,取放使用方便及液氮揮發(fā)量(經(jīng)濟)三種因素,。
7.離心機:進行細胞培養(yǎng)時,常規(guī)需要進行制備細胞懸液,、調整細胞密度,、洗滌、收集細胞等工作,,通常需要使用實驗室離心機,。一般可常規(guī)配置4000rpm的臺式離心機,例如細胞沉降,,使用低速離心機即可,,離心力過大有時可能引起細胞的損傷。
8.天平:常用的有扭力天平,、精密天平及各種電子天平。
9.消毒器:一般為高壓蒸汽滅菌鍋,,直接或間接與細胞接觸的物品均需消毒滅菌處理,。
10.濾器:目前細胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液,包括人工合成培養(yǎng)液,、血清,、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白,、多肽,、生長因子等物質,,這些物質在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能,因而上述液體多采用濾過消毒以除去細菌,。目前常使用的濾器有玻璃濾器和微孔濾器,,各種濾器有其使用原理和特點。
常用的培養(yǎng)器皿:
培養(yǎng)用器皿是供細胞接種,、生長等用的器皿,,可由透明度好、無毒的中性硬質玻璃或無毒而透明光滑的特制塑料制成,。細胞培養(yǎng)中需要的各種耗材,各類細胞培養(yǎng)板,,細胞培養(yǎng)瓶,平皿移液管等,。
培養(yǎng)瓶:由玻璃或塑料制成,。主要用于培養(yǎng)、繁殖細胞,。進行培養(yǎng)時培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,,膠塞多用于密封培養(yǎng)。
培養(yǎng)皿:由玻璃或塑料制成,,供盛取,、分離、處理組織或做細胞毒性,、集落形成,、單細胞分離、同位素摻入,、細胞繁殖等實驗使用,。常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有 10cm、9cm,、6cm,、3.5cm等。
多孔培養(yǎng)板:為塑料制品,??晒┘毎寺〖凹毎拘缘雀鞣N檢測實驗使用。其優(yōu)點是節(jié)約樣本及試劑,,可同時測試大量樣本,,易于進行無菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格,,常用的規(guī)格有:96孔,、24孔、12孔,、6孔,、4孔等,。
II、細胞培養(yǎng)實驗室特殊設備
細胞培養(yǎng)實驗室除了應配備上述的常用基本設備以外,,如有條件,,可添置一些特殊或先進的設備儀器,以便更有效,、更精確,、更深入地進行實驗室工作。例如:
(1)酶聯(lián)免疫檢測儀——可用于進行免疫學測定及細胞毒性,、藥物敏感性檢測等,。
(2) 超低溫冰箱(-80℃)——便于儲存某些試劑及標本。
(3)旋轉培養(yǎng)器——用于某些特殊細胞或需要收獲大量細胞的培養(yǎng),。
(4) 熒光顯微鏡——進行熒光染色樣本的觀察,。
(5) 流式細胞儀——可更精確及快速檢測細胞。
(6)用于檢測細胞培養(yǎng)條件的各種儀器,,例如專門為快速分析細胞培養(yǎng)基中主要或關鍵營養(yǎng)成分,、代謝產物及氣體含量設計的多功能細胞培養(yǎng)分析儀、手提式CO2濃度測定儀等,。
很多人會詢問,,細胞培養(yǎng)獲得成功的關鍵要素是什么? 小編的經(jīng)驗就是:
1了解所培養(yǎng)細胞的生長周期;
2 細心+實驗條件允許
3 培養(yǎng)細胞需要有備份的條件下去嘗試新的培養(yǎng)方式,,否則實驗失敗了導致細胞株也沒了,。實驗記錄詳細完整也是很關鍵的
4 選擇合適的實驗室儀器。
今天,,小編就給大家推薦適合于細胞培養(yǎng)的離心機 —— FC5706
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