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一,、產(chǎn)品簡介

BrainBits小鼠全腦培養(yǎng)試劑盒，提供完整的培養(yǎng)服務(wù)，包含從新鮮組織開始培養(yǎng)所需的一切,。E18組織用2ml含B27的THRYVE胚胎儲(chǔ)存介質(zhì)運(yùn)送。立即使用組織能獲得最高的細(xì)胞產(chǎn)量,，但注意組織可在4-8°C下保存一周,。這個(gè)試劑盒是研究人員為下一代研究人員提供剛剛開始的可能性的實(shí)踐方法，十分適用于科研,。

★產(chǎn)品組分：1 E18小鼠全腦,、12mL NbAstro、6.2mg木瓜蛋白酶,、5mL HE-Ca ,、1個(gè)帶橡膠球的火拋光移液、1對(duì)PDL涂層蓋板,。

二,、產(chǎn)品使用

（一）制劑（無菌罩室溫）

1. 將6mg無菌木瓜蛋白酶（PAP 6mg）溶解于3ml THRYVE Embryonic-CaCl中，制備細(xì)胞解離液,，最終工作濃度為

2毫克/毫升木瓜蛋白酶,。在30℃下孵育10分鐘使其溶解。放入冰箱或冰中備用,。組織和木瓜蛋白酶必須處于相同的溫度

（根據(jù)處理組織的數(shù)量,，可能需要幾個(gè)單位）。

2. 將80µl臺(tái)普蘭藍(lán)（Sigma T8154）加入0.5ml試管中進(jìn)行第9步,。

（二）細(xì)胞分散（無菌罩室溫）：

1. 用2ml移液管,，用最少的培養(yǎng)基小心地將組織轉(zhuǎn)移到木瓜蛋白酶上。將THRYVE胚胎wanquan移植到一個(gè)新的無菌15ml試管中

保存到步驟3,。

2. 組織與木瓜蛋白酶在30℃下孵育10分鐘,。輕輕地旋轉(zhuǎn)每2分鐘或使用加熱搖振板在30℃和150rpm。

3. 用2ml移液管從木瓜蛋白酶中除去帶有少量培養(yǎng)基的組織,，并從步驟1中返回THRYVE胚胎wanquan培養(yǎng)基,。

4. 使用硅化巴斯德移液器，將組織分散不超過10倍或90%,，避免產(chǎn)生氣泡,。可選：加入400µl 1mg/ml DNase I溶液（StemCell Technologies 07469）加入細(xì)胞漿液中,，在室溫下孵育15分鐘,，輕彈或旋轉(zhuǎn)。

5. 讓未分散的碎片靜置1分鐘,。

6. 將含有分散細(xì)胞的上清液轉(zhuǎn)移到15ml無菌管中,。留下約50μl含有碎片的THRYVE胚胎wanquan體?？蛇x用70µm濾池過濾細(xì)胞液,。

7. 旋轉(zhuǎn)1100rpm (200 x G) 1分鐘,。丟棄上清，留下含有微球的約50μl THRYVE胚胎wanquan液,。

8. 分散細(xì)胞顆粒（用手指或管輕彈管底部）,，重懸于1ml NbActiv1™中。

9. 取20μl細(xì)胞液加入含有80μl臺(tái)盼藍(lán)（1:5稀釋）的0.5ml試管中,，或按實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)行計(jì)數(shù)程序計(jì)數(shù),。

10. 使用血細(xì)胞計(jì)（計(jì)算細(xì)胞/ml）或使用當(dāng)前的實(shí)驗(yàn)室程序計(jì)數(shù)細(xì)胞。

（三）細(xì)胞電鍍（無菌罩室溫）：

1. 用NbActiv1™稀釋0.2ml/cm2的細(xì)胞,，并以16,000個(gè)細(xì)胞/cm2或所需濃度進(jìn)行板載,。

2. 37℃，5% CO2, 9% O2, 95%濕度（或環(huán)境O2）孵育,。

3. 4天后,，神經(jīng)元顯示軸突和樹突；突觸和動(dòng)作電位開始于7天,。

4. 每3-4天用新鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一半的培養(yǎng)基。

（四）可行性分析:

1. 用37℃HBSS （0.2ml/cm2底物）沖洗兩次,。

2. 用15mg/ml雙醋酸熒光素丙酮原液和4.6mg/ml碘化丙啶水原液配制染料混合物,，各稀釋15µl，加入1.5ml HBSS（1:100稀釋）,。

3. 在步驟1中加入的0.2ml HBSS中加入20µl染料混合物（1:10稀釋）,。

4. 約1分鐘后，使用適合熒光素?zé)晒獾乃{(lán)色激勵(lì)（綠色細(xì)胞）計(jì)數(shù)活細(xì)胞,。用綠色激勵(lì)計(jì)數(shù)死細(xì)胞碘化丙啶熒光（小紅核）,。

5. 生存能力=（綠色細(xì)胞/單位面積）/（總細(xì)胞數(shù)/單位面積）或生存=綠色細(xì)胞/（綠色+紅色細(xì)胞）。

三,、產(chǎn)品目錄表

三,、代理簡介

BrainBits小鼠全腦培養(yǎng)試劑盒——天津益元利康生物科技有限公司，成立于2018年,，坐落于天津經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū),。公司產(chǎn)品線涉及細(xì)胞與基因治療、免疫學(xué),、分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)等多個(gè)方向，專注于生命科學(xué)試劑,、耗材,、細(xì)胞、儀器等產(chǎn)品銷售,，經(jīng)營的品牌主要有：ThermoFisher,、Sigma,、Qiagen、EZBioscience,、ZYMO Research,、MedKoo、Abcam等等,。我們提供質(zhì)優(yōu)價(jià)美的產(chǎn)品,、及時(shí)到位的服務(wù)，努力成長為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商,。