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肝癌3D類器官培養(yǎng)基產(chǎn)品說明：肝癌類器官培養(yǎng)基（Hepatocarcinoma Organoid Medium）是一種為促進(jìn)肝癌類器官體外形成和擴(kuò)增而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基,。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng),，含有必需和非必需的氨基酸、維生素,、有機(jī)和無機(jī)化合物,、激素、生長因子,、微量礦物質(zhì)等,。該培養(yǎng)基的*配方可以提供一個(gè)較適合的細(xì)胞所需營養(yǎng)環(huán)境，選擇性地促進(jìn)體外人肝癌類器官的生長,。

肝癌3D類器官培養(yǎng)基產(chǎn)品優(yōu)勢：
(1) 培養(yǎng)成功率高

(2) 體外持續(xù)擴(kuò)增

(3) 保持腫瘤特征

(4) 藥敏結(jié)果與臨床數(shù)據(jù)接近

使用說明：
?  實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
（1）消化好的肝癌原代細(xì)胞懸液15mL無菌離心管,、1.5mL離心管、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板,、移液器,、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30 min,。
（2）提前30min從4℃冰箱取出肝癌類器官培養(yǎng)基平衡至室溫,，提前從-20℃冰箱取出所需體積的基質(zhì)膠冰上融化。
?  肝癌類器官培養(yǎng)
（1）將消化好的肝癌細(xì)胞懸液計(jì)數(shù),，按照1-2萬細(xì)胞每孔計(jì)算所需的細(xì)胞數(shù),，根據(jù)計(jì)算好的體積吸取細(xì)胞懸液加入預(yù)冷的1.5mL離心管中。
（2）補(bǔ)齊預(yù)冷的DMEM/F12至所需體積,，將預(yù)冷后的細(xì)胞懸液加入等體積的基質(zhì)膠中輕輕混勻（全程冰上操作）,，然后將細(xì)胞與基質(zhì)膠的混合液按照40μL/孔接種于24孔板。
（3）將接種好的培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱至少30min,，待基質(zhì)膠*凝固,，然后沿24孔壁每孔緩慢加入500μL預(yù)先恢復(fù)至室溫的類器官培養(yǎng)基，3天后鏡下觀察類器官形成情況,，粒徑大于50μm即認(rèn)為類器官已經(jīng)形成,，每5天更換一次培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),，持續(xù)觀察類器官大小，鏡下觀察大部分類器官大小均大于50μm且大小不再增大即可收集類器官進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),。
?  肝癌類器官收集
（1）吸去培養(yǎng)基,，每孔加入200μL基質(zhì)膠解離試劑。
（2）輕輕吹打混勻,，收集至15mL離心管中,，37℃解離30min（具體解離時(shí)間根據(jù)實(shí)際情況決定，以無明顯大塊膠狀物為準(zhǔn)）,，解離之后1500rpm離心3min,，輕輕吸去上清，待用,。
?  肝癌類器官傳代
（1）解離之后的細(xì)胞加入適量的消化酶,，37℃,，200rpm消化（具體時(shí)間根據(jù)類器官大小和數(shù)量決定,，以無肉眼可見顆粒為準(zhǔn)）。
（2）消化*后1500rpm離心3min,，輕輕吸去上清,，使用終止培養(yǎng)基重懸后1500rpm離心3min，加入預(yù)冷的DMEM/F12培養(yǎng)基進(jìn)行重懸,，計(jì)數(shù),，按照培養(yǎng)步驟操作繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)：
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫,。
2.使用產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無菌操作,，避免污染。
3.為保持本產(chǎn)品的最佳使用效果,，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中,。4.請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期,，必須放棄使用,。
5.樣本需為腫瘤術(shù)中樣本，且腫瘤細(xì)胞比例越高（至少>50%）,，培養(yǎng)成功率越高,，不推薦用于少量樣本（如穿刺或者循環(huán)腫瘤細(xì)胞）的培養(yǎng)。
6.本產(chǎn)品僅用于科研用途,，不能用于體外診斷,。