一、Zymo甲基化試劑盒核心技術特點
1. 高效亞硫酸鹽轉化
-轉化率>99%:采用優(yōu)化的亞硫酸鹽處理體系(如EZ DNA Methylation-Gold™),,確保未甲基化胞嘧啶全部轉化為尿嘧啶,,甲基化位點保留完整。
- 快速處理:全程僅需3小時(Lightning系列)至6小時(Gold系列),,比傳統(tǒng)方法縮短50%時間,。
2. 廣泛樣本兼容性
- DNA類型:適用于基因組DNA(≥50 pg)、FFPE樣本(需預修復),、cfDNA(≥1 ng),。
- 污染物耐受:可處理含10% SDS或1%血紅蛋白的樣本(需配合Zymo Clean & Concentrator純化)。
3. 高靈敏度與重復性
- 檢測下限:甲基化頻率 0.1%(如用于腫瘤早篩的ctDNA檢測),。
- 批間差異:CV <5%(基于NIST標準品驗證),。
二、Zymo甲基化試劑盒與主流產(chǎn)品線對比
三,、Zymo甲基化試劑盒典型應用場景
1. 腫瘤表觀遺傳研究
- 早篩標志物驗證:檢測ctDNA中 SEPT9,、SHOX2 等基因甲基化(靈敏度95%)。
- 甲基化分型:基于850K芯片數(shù)據(jù)構建TCGA樣甲基化亞型(如膠質瘤IDH1突變關聯(lián)),。
2. 發(fā)育生物學
- 單細胞甲基化分析:配合Zymo PicoMethyl™ 試劑盒,,處理單細胞DNA(適用于10-100個細胞)。
3. 植物表觀遺傳學
- 環(huán)境脅迫響應:檢測 CpG島 和 CHH位點 甲基化動態(tài)(需配合BS-Seq分析),。
四,、Zymo甲基化試劑盒操作流程優(yōu)化建議
1. DNA質量控制
- 使用Nanodrop檢測A260/A280(1.8-2.0),A260/A230 >1.8,。
- FFPE樣本需先進行 脫蠟修復(推薦Zymo FFPE DNA Kit),。
2. 轉化條件優(yōu)化
- 高溫變性步驟:98℃ 8分鐘(Gold系列)→ 95℃ 30秒(Lightning系列)。
- 轉化后純化:使用Zymo-Spin IC Column去除亞硫酸鹽殘留(回收率>90%),。
3. 下游兼容性
- PCR擴增:推薦使用ZymoTaq™ PreMix(抗尿嘧啶干擾,,擴增效率提升30%)。
- NGS建庫:配合Methyl-Seq Library Kit(UMI標記,,降低擴增偏差),。
五、Zymo甲基化試劑盒與競品性能對比
六,、Zymo甲基化試劑盒用戶反饋與解決方案
- 常見問題:
1. 轉化后DNA片段化 → 縮短變性時間至5分鐘,,使用低熔點瓊脂糖包埋。
2. PCR擴增失敗 → 增加2-4個熱啟動循環(huán)(98℃ 10秒→60℃ 30秒),。
3. 批次間差異 → 使用同一批次轉化柱,,避免不同溫度環(huán)境操作。
- 技術支持:提供 免費實驗方案優(yōu)化服務(48小時內響應),。
【總結】
Zymo甲基化試劑盒在轉化效率,、速度,、小樣本兼容性 方面表現(xiàn)很好,尤其適合腫瘤液體活檢和單細胞表觀遺傳研究,。
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