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引言
CD8 T細(xì)胞在免疫應(yīng)答中扮演核心角色,，其分離純度直接影響下游實(shí)驗(yàn)的可靠性,。然而，傳統(tǒng)分離方法常面臨操作復(fù)雜,、細(xì)胞活性受損等問題,。英諾思推出的EasyIso™ 人類CD8 T細(xì)胞分離試劑盒（貨號(hào)SN3103），通過創(chuàng)新的無柱磁極分離技術(shù),，實(shí)現(xiàn)高純度,、快速且溫和的CD8 T細(xì)胞分選，為科研與臨床研究提供高效工具,。上期介紹了原理《英諾思EasyIso™ 人類CD8 T細(xì)胞分離試劑盒（SN3103）實(shí)驗(yàn)原理》,，這期介紹一下操作步驟。

一,、操作步驟：快速四步法

1. 樣本制備：將PBMC單細(xì)胞懸液濃度調(diào)整至1×10? cells/mL,；

2. 抗體孵育：按100 μL/mL加入EasyIso™ Human CD8 T Cell Isolation Cocktail，常溫孵育10分鐘

3. 磁珠結(jié)合：加入鏈霉親和素納米磁珠（100 μL/mL）,，輕柔混勻后孵育5分鐘,；

4. 磁極分離：

使用磁力架吸附3-5分鐘（單孔/聯(lián)排架）；

傾斜磁力架,，將富含CD8 T細(xì)胞的上清轉(zhuǎn)移至新管中,，即可獲得高純度細(xì)胞。

全程僅需20分鐘,，顯著提升實(shí)驗(yàn)效率,。

二、關(guān)鍵試劑與設(shè)備要求

緩沖液：推薦使用FACS Buffer（1×PBS + 0.02% EDTA + 2% FBS）,，提高細(xì)胞得率,；

耗材：70 μm無菌濾網(wǎng)、無菌離心管,；

儀器：離心機(jī),、磁力架（兼容單孔或聯(lián)排管）。

三,、使用建議與注意事項(xiàng)

PBMC制備：推薦采用淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)行密度梯度離心,，避免紅細(xì)胞裂解法；

無菌操作：全程需在超凈臺(tái)中進(jìn)行,，防止污染,；

滲透壓穩(wěn)定：確保FACS Buffer配制準(zhǔn)確，保護(hù)敏感免疫細(xì)胞,；

磁珠處理：使用前充分震蕩混勻磁珠30秒,，確保結(jié)合效率,。

四、數(shù)據(jù)驗(yàn)證：純度高達(dá)91.2%

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示,，使用SN3103試劑盒分選后：

分選前：PBMC中CD8+ T細(xì)胞占比14.3%,；

分選后：CD3+CD8+ T細(xì)胞純度提升至91.2%（圖B），滿足高標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)需求,。

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