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以6孔板細胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)染為例:
使用細胞培養(yǎng)液3ml,，DNA質(zhì)粒3ug,，PEI轉(zhuǎn)染試劑9ug?？梢愿鶕?jù)不同細胞特性,，增加DNA和PEI使用量,。
一,、細胞培養(yǎng)
1. 轉(zhuǎn)染前24 h左右對細胞進行傳代，接種密度約為1 - 3 × 105 cells/well,。細胞接種密度,，大約在60%左右。
2. 過夜培養(yǎng),。
3. 吸出培養(yǎng)液,，使用新鮮培養(yǎng)液清洗3-4次。然后,，加入2.7 ml新鮮配置的wanquan培養(yǎng)基,。因為細胞過夜生長的分泌物有可能影響轉(zhuǎn)染效率，所有建議進行細胞清洗操作,。更換新鮮培養(yǎng)液,，有助于轉(zhuǎn)染后的細胞表達和生長，防止細胞營養(yǎng)的不足,。
也可以不吸出培養(yǎng)液,，不更換新鮮培養(yǎng)液，直接進行細胞轉(zhuǎn)染,。
4. 當細胞匯合度達到60% - 80%時,，轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率。
二,、PEI/DNA復(fù)合物配置
1. 在1.5 ml無菌離心管中加入150 μl opti-MEM無血清培養(yǎng)基,，并加入3 ug DNA質(zhì)粒，用移液器輕輕混勻,。
2. 在1.5 ml無菌離心管中加入150 μl opti-MEM無血清培養(yǎng)基,，并加入9 ug PEI轉(zhuǎn)染試劑儲存液,，用移液器輕輕混勻。
3. 將PEI-opti-MEM滴加至DNA-opti-MEM中,，用移液器輕輕混勻,，室溫靜置15 - 30 min后可用于轉(zhuǎn)染。注意：形成的PEI/DNA復(fù)合物溶液盡量在30 min內(nèi)使用,。
4. PEI/DNA復(fù)合物的形成,，一定是分別在無血清培養(yǎng)基中稀釋后，再進行混勻,。血清的存在會干擾復(fù)合物的形成,。
三、細胞轉(zhuǎn)染
1. 將PEI/DNA復(fù)合物混合液滴加至6孔板培養(yǎng)基中,，輕輕晃動吹打培養(yǎng)液使PEI/DNA復(fù)合物均勻分散,。
2. 過夜培養(yǎng)24-72小時。
四,、初始轉(zhuǎn)染條件
五,、PEI轉(zhuǎn)染效率
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