胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)在儲(chǔ)存或使用過程中出現(xiàn)少量沉淀通常是正?,F(xiàn)象,,但需根據(jù)沉淀的性質(zhì)和實(shí)驗(yàn)需求判斷是否需要處理。以下是具體分析
一,、沉淀的常見原因
1. 纖維蛋白原聚合:
胎牛血清中含有纖維蛋白原(Fibrinogen),,在解凍或長(zhǎng)期靜置后可能形成絮狀或顆粒狀沉淀(肉眼可見白色絮狀物)。這是最常見的正?,F(xiàn)象,。
2. 磷酸鈣結(jié)晶:
血清中的鈣,、磷離子在低溫或反復(fù)凍融時(shí)可能形成細(xì)微結(jié)晶(顯微鏡下可見)。
3. 脂蛋白聚集:
血清中的脂類成分在低溫下可能析出,,形成渾濁或沉淀,。
4. 蛋白質(zhì)變性:
高溫、劇烈震蕩或反復(fù)凍融可能導(dǎo)致部分蛋白質(zhì)變性沉淀(通常伴隨顏色變化或渾濁),。
二,、如何判斷是否正常?
特征 | 正常沉淀 | 異常變質(zhì) |
顏色 | 血清仍為淡黃色,、透明 | 渾濁,、發(fā)紅或發(fā)黑 |
沉淀形態(tài) | 白色絮狀或細(xì)顆粒,可溶解于37°C水浴 | 塊狀,、無法溶解,,或伴有異味 |
細(xì)胞培養(yǎng)影響 | 通常不影響細(xì)胞生長(zhǎng) | 細(xì)胞死亡、貼壁差或污染 |
三,、如何處理沉淀,?
常規(guī)操作:
將血清置于 37°C水浴 中輕輕搖晃至沉淀wanquan溶解(纖維蛋白原或磷酸鈣沉淀通常可逆),。
溶解后 4°C靜置1小時(shí),,取上清液使用(避免吸取底部沉淀)。
過濾除菌:
若沉淀較多或?qū)嶒?yàn)敏感(如干細(xì)胞培養(yǎng)),,可用 0.22μm濾膜 過濾后使用,。
四、需要更換血清的情況
以下情況可能提示血清變質(zhì),,建議停止使用:
1. 沉淀無法通過37°C溶解,,且血清渾濁、變色,。
2. 血清有明顯異味(如酸敗味),。
3. 使用后細(xì)胞出現(xiàn)異常死亡或污染。
五,、如何減少沉淀產(chǎn)生,?
1. 分裝凍存:避免反復(fù)凍融,按需分裝為小份(如50ml/管),,-20°C保存,。
2. 緩慢解凍:4°C過夜解凍,或室溫靜置至部分融化后混勻,。
3. 輕柔操作:避免劇烈搖晃或高溫環(huán)境(如長(zhǎng)時(shí)間置于37°C水?。?/span>
總結(jié)
少量白色絮狀沉淀(纖維蛋白原相關(guān))是正常現(xiàn)象,,不影響大多數(shù)實(shí)驗(yàn),;若沉淀不可逆、血清性狀改變或影響細(xì)胞活性,,則需更換新批次血清,。建議選擇正規(guī)品牌(如Gibco、HyClone)并嚴(yán)格按說明書儲(chǔ)存,!
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