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一,、Lipo 2000介紹

賽默飛Lipo2000轉(zhuǎn)染試劑是一種多功能轉(zhuǎn)染試劑,，經(jīng)證明可以將各種有效載荷有效地轉(zhuǎn)染到各種貼壁和懸浮細胞系中。

二,、Lipo 2000轉(zhuǎn)染步驟

1.轉(zhuǎn)染前一天,，胰酶消化細胞并計數(shù)(0.5-2x105)細胞鋪板，使其在轉(zhuǎn)染日密度為90-95%,。細胞鋪板在0.5 ml含血清,，不含抗生素的正常生長的培養(yǎng)基中。2.對于每孔細胞,，使用50 ul無血清培養(yǎng)基(如OPTI-MEM I培養(yǎng)基)稀釋0.8-1.0ugDNA,，輕輕混勻。

3.使用前將Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑輕輕混勻,，用50ul無血清培養(yǎng)基(如OPTIMEM I培養(yǎng)基)稀釋1-3 ul Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑,，輕輕混勻。Lipofectamine2000稀釋后,，在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合(<30分鐘),。NOTE:若使用DMEM培養(yǎng)基,，則需在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合。4.混合稀釋的DNA(第二步)和稀釋的Lipofectamine 2000(第三步),。室溫放置20分鐘,。

5.(optional)將24孔板中的舊營養(yǎng)液吸出，用無血清培養(yǎng)基清洗兩次,。加入0.5ml無血清配養(yǎng)基,。

6.直接將復合物加入到每孔中，搖動培養(yǎng)板,，輕輕混勻,。

7.在37℃，5%CO2中保溫24-48小時,。無需去掉復合物或更換培養(yǎng)基,。或者在4-5小時后更換培養(yǎng)生長基也不會降低轉(zhuǎn)染活性,。

8.在細胞中加入復合物24-72小時后,，分析細胞抽提物或進行原位細胞染色，檢測報告基因活性,。這依賴于細胞類型和啟動子活性,。對穩(wěn)定表達，在開始轉(zhuǎn)染一天后將細胞傳代至新鮮培養(yǎng)基中,，兩天后加入篩選抗生素,。進行穩(wěn)定表達需要數(shù)天或數(shù)周。貼壁細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:

轉(zhuǎn)染后24小時,，將細胞以>1:10的比例傳代至新鮮培養(yǎng)基中,，次日加入選擇性培養(yǎng)基。

三,、Lipo2000購買渠道

賽默飛代理——天津益元利康生物科技有限公司,，公司產(chǎn)品線涉及細胞與基因治療、免疫學,、分子生物學,、細胞生物學等多個方向，專注于生命科學試劑,、耗材,、細胞、儀器等產(chǎn)品銷售,。