前言：WB實驗中的轉膜，顧名思義,，是將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體上,，同時維持其相對位置和分辨率的過程。需要根據(jù)雜方案和被轉移蛋白的特性.以及蛋白分子量大小等條件去選擇合適材質,、孔徑的雜交膜,。
一、膜材質的選擇
Western Blot實驗中zui常用的轉印膜有兩種：PVDF膜（聚偏二氟乙烯膜）和NC膜（硝酸纖維素膜）,。
1. NC膜
NC膜背景很低,，可結合蛋白質和核酸進行各種印跡應用,。可適用于蛋白質印跡法,、RNA印跡法,、DNA印跡法和斑點雜交技術。但缺點是對于分子量較小的蛋白質會在洗滌時丟失,，且NC膜韌性較差,，操作時容易碎，對操作的技巧要求較高,；
2. PVDF膜
PVDF膜在機械強度和化學相容性上都具有更good的性能,，且靈敏度高、分辨率和蛋白親和力較其他的膜要高,，非常適合分子量較小的蛋白質檢測,，通常需要甲醇/乙醇預先活化。現(xiàn)在有新出的免甲醇潤濕的PVDF膜,，可以免去甲醇對實驗操作人員的傷害,。
3.根據(jù)膜材質的特性選擇轉印膜，涉及以下幾方面的考慮：
蛋白結合能力
是否需要用醇預濕
開展多次剝離（stripping）和再次檢測（reprobing）實驗的能力
蛋白觀察
長期印跡保存
信噪比
可以看出常規(guī)PVDF膜相對NC膜優(yōu)點更多,，實用性廣,。
PVDF膜可提供更好的蛋白截留率、物理強度和廣泛的化學兼容性,。其中更高的機械強度和出色的耐化學性使PVDF膜成為免疫檢測中各種染色應用和多次檢測的理想選擇,。使用PVDF膜的另一個優(yōu)點是，從單塊凝膠上轉移的平行重復泳道可用于后續(xù)各種應用,，如考馬斯亮藍染色，接著切割條帶進行N端測序,，蛋白水解/肽段分離/內部測序,，以及免疫檢測。
二,、選擇膜孔徑
選到合適材質的膜之后,，還需要根據(jù)檢測蛋白的大小，選擇合適的膜孔徑,。Western Blot轉印膜通常有兩種孔徑大?。?/span>0.2μm和0.45μm。
推薦產品：
1. Immobilon®-P 0.45umzui chang用的WB轉印膜,，適用于一般的免疫印
跡應用,。（貨號：IPVH00010）
0.45μm：更加常用，適合大于20kD的蛋白,，背景較低
2.Immobilon®-PSQ 0.2um小分子蛋白/肽WB轉印膜（貨號：ISEQ00010）
適用于蛋白測序和低分子量蛋白的免疫印跡,。它有著更高的蛋白結合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率,。0.2μm ：特別適合小于20kD的蛋白；推薦用于低豐度蛋白檢測,。結合能力是由孔的內部表面積來決定的（文獻參考：Mansfield,，1994）。0.2μm轉印膜的內部表面積大約是0.45μm轉印膜的三倍,，使其吸附能力更高
三,、選擇合適的轉印膜形式
• 卷膜
• 預切膜
預切好的膜與所有預制膠以及大部分市售的凝膠電泳系統(tǒng)兼容。
對于用量較小的情況,，優(yōu)先推薦選擇預裁切的包裝產品,，使用比較便捷也可以避免浪費。對于用量較大的情況,，推薦使用整卷產品,。預裁切產品無需再進行裁切，使用非常便捷,；并且由于機械化裁切的效率很高,，可以避免手工裁切導致的膜裁切時的浪費。
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