前言：WB實驗中的轉(zhuǎn)膜，顧名思義,，是將電泳后分離的蛋白質(zhì)從凝膠中轉(zhuǎn)移到固相載體上,，同時維持其相對位置和分辨率的過程。需要根據(jù)雜方案和被轉(zhuǎn)移蛋白的特性.以及蛋白分子量大小等條件去選擇合適材質(zhì),、孔徑的雜交膜,。
一、膜材質(zhì)的選擇
Western Blot實驗中zui常用的轉(zhuǎn)印膜有兩種：PVDF膜（聚偏二氟乙烯膜）和NC膜（硝酸纖維素膜）,。
1. NC膜
NC膜背景很低,，可結(jié)合蛋白質(zhì)和核酸進行各種印跡應用?？蛇m用于蛋白質(zhì)印跡法,、RNA印跡法、DNA印跡法和斑點雜交技術(shù),。但缺點是對于分子量較小的蛋白質(zhì)會在洗滌時丟失,，且NC膜韌性較差，操作時容易碎,，對操作的技巧要求較高,；
2. PVDF膜
PVDF膜在機械強度和化學相容性上都具有更good的性能，且靈敏度高,、分辨率和蛋白親和力較其他的膜要高,，非常適合分子量較小的蛋白質(zhì)檢測，通常需要甲醇/乙醇預先活化?，F(xiàn)在有新出的免甲醇潤濕的PVDF膜,，可以免去甲醇對實驗操作人員的傷害。
3.根據(jù)膜材質(zhì)的特性選擇轉(zhuǎn)印膜,，涉及以下幾方面的考慮：
蛋白結(jié)合能力
是否需要用醇預濕
開展多次剝離（stripping）和再次檢測（reprobing）實驗的能力
蛋白觀察
長期印跡保存
信噪比
可以看出常規(guī)PVDF膜相對NC膜優(yōu)點更多,，實用性廣,。
PVDF膜可提供更好的蛋白截留率、物理強度和廣泛的化學兼容性,。其中更高的機械強度和出色的耐化學性使PVDF膜成為免疫檢測中各種染色應用和多次檢測的理想選擇,。使用PVDF膜的另一個優(yōu)點是，從單塊凝膠上轉(zhuǎn)移的平行重復泳道可用于后續(xù)各種應用,，如考馬斯亮藍染色,，接著切割條帶進行N端測序，蛋白水解/肽段分離/內(nèi)部測序,，以及免疫檢測,。
二、選擇膜孔徑
選到合適材質(zhì)的膜之后,，還需要根據(jù)檢測蛋白的大小,，選擇合適的膜孔徑。Western Blot轉(zhuǎn)印膜通常有兩種孔徑大?。?/span>0.2μm和0.45μm,。
推薦產(chǎn)品：
1. Immobilon®-P 0.45umzui chang用的WB轉(zhuǎn)印膜,，適用于一般的免疫印
跡應用,。（貨號：IPVH00010）
0.45μm：更加常用，適合大于20kD的蛋白,，背景較低
2.Immobilon®-PSQ 0.2um小分子蛋白/肽WB轉(zhuǎn)印膜（貨號：ISEQ00010）
適用于蛋白測序和低分子量蛋白的免疫印跡,。它有著更高的蛋白結(jié)合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。0.2μm ：特別適合小于20kD的蛋白,；推薦用于低豐度蛋白檢測,。結(jié)合能力是由孔的內(nèi)部表面積來決定的（文獻參考：Mansfield，1994）,。0.2μm轉(zhuǎn)印膜的內(nèi)部表面積大約是0.45μm轉(zhuǎn)印膜的三倍,，使其吸附能力更高
三、選擇合適的轉(zhuǎn)印膜形式
• 卷膜
• 預切膜
預切好的膜與所有預制膠以及大部分市售的凝膠電泳系統(tǒng)兼容,。
對于用量較小的情況,，優(yōu)先推薦選擇預裁切的包裝產(chǎn)品，使用比較便捷也可以避免浪費,。對于用量較大的情況,，推薦使用整卷產(chǎn)品。預裁切產(chǎn)品無需再進行裁切,，使用非常便捷,；并且由于機械化裁切的效率很高，可以避免手工裁切導致的膜裁切時的浪費。
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