細胞如若在生長過程中遇到漂浮困境,，你有沒有想過會是操作不當？,！接下來，跟隨康康一起，探討這個非微生物原因?qū)е碌募毎囵B(yǎng)問題,，并找到讓它正常發(fā)展的解決方案,。
復蘇后細胞漂浮原因一：細胞本身貼壁能力較弱
比如細胞轉(zhuǎn)染的明星細胞293T，它生長較快,，但貼壁能力弱,，容易出現(xiàn)明顯的成片脫落現(xiàn)象。
293細胞
∝解決辦法：提前使用明膠包被板子,，增強吸附性,。另外，還建議使用TC處理（tissue culture treated）的培養(yǎng)瓶/皿促進細胞貼壁附著,。
復蘇后細胞漂浮原因二：培養(yǎng)基選擇錯誤
比如293T細胞培養(yǎng),，推薦使用的培養(yǎng)基為DMEM（高糖）+10%FBS，但是如果使用RPMI-1640+10%FBS做為培養(yǎng)基,，培養(yǎng)液糖分不足,，故不夠支持細胞生長所需。雖然用錯了培養(yǎng)基,，但這不代表細胞一定不能生長,。但如果培養(yǎng)細胞中長時間使用不正確的培養(yǎng)基，甚至缺少必要營養(yǎng)組分（例如優(yōu)質(zhì)的血清）,，那細胞真的就漂了,。
∝解決辦法：參照細胞使用說明書或者實驗室預實驗結(jié)果，使用合適的培養(yǎng)體系,。對于間充質(zhì)干細胞這類生存條件苛刻的細胞,，培養(yǎng)基和血清的質(zhì)量要求會更高。
復蘇后細胞漂浮原因三：復蘇過程中操作不當
復蘇過程水溫太低,，解凍時間不足,，冰晶損傷了細胞；水溫太高,，燙傷了細胞,。
∝解決辦法：復蘇細胞過程，一般是從液氮罐中取出凍存管,，立即放入到37℃水槽中快速解凍,，搖晃凍存管，確保在1分鐘內(nèi)完成解凍,。
復蘇后細胞漂浮原因四：離心對細胞造成損傷
去除凍存液中殘留的DMSO過程,，在細胞復蘇過程中，解凍完畢之后,，為了防止殘留DMSO對細胞的毒性影響,，很多小伙伴會將細胞懸液轉(zhuǎn)入到15mL離心管內(nèi),，離心去上清，再重懸細胞接種培養(yǎng),。但這種情況,，會導致剛復蘇還極為脆弱的細胞，因為離心機的離心力更為脆弱甚至破損死亡,。
∝解決辦法：
其實除了少數(shù)對DMSO敏感的細胞之外（例如DMSO誘導HL-60分化成類中性粒細胞）,，絕大多數(shù)細胞應在解凍之后，直接接種在培養(yǎng)皿內(nèi),，隔天再更換新鮮培養(yǎng)基去除DMSO,。
培養(yǎng)基推薦：中科百抗，可提供DMEM\1640培養(yǎng)基,，需要請聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司,。
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