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買到了BrainBits小鼠游離皮質(zhì)培養(yǎng)試劑盒后,，該如何使用呢,？

一、制劑（無(wú)菌罩室溫）：

1. 將80µl臺(tái)普蘭藍(lán)（Sigma T8154）加入0.5ml試管中進(jìn)行下面的步驟4,。

2. 12ml NbActiv1™至室溫,。

3. 將2ml分離的初級(jí)神經(jīng)元管置于30℃水浴中加熱1分鐘。

二,、細(xì)胞分散（無(wú)菌罩室溫）：

1. 用硅化巴斯德移液管,，將整個(gè)試管的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到無(wú)菌15ml離心管中。

2. 旋轉(zhuǎn)1100rpm (200 x G),， 1分鐘,。丟棄上清，留下約50µl含有微球的THRYVE胚胎wanquan液,。

3. 分散細(xì)胞顆粒（用手指或管輕彈管底部）,，重懸于1ml NbActiv1™中。

4. 將20µl細(xì)胞液加入含有80µl臺(tái)盼藍(lán)（1:5稀釋）的0.5ml試管中,。

5. 使用血細(xì)胞計(jì)（計(jì)算細(xì)胞/ml）或使用當(dāng)前的實(shí)驗(yàn)室程序計(jì)數(shù)細(xì)胞,。

三、細(xì)胞電鍍（無(wú)菌罩室溫）：

1. 用NbActiv1™稀釋0.2ml/cm2的細(xì)胞,，用16000個(gè)細(xì)胞/cm2或所需濃度的平板,。

2. 37℃，5% CO2, 9% O2, 95%濕度（或環(huán)境O2）孵育,。

3. 4天后,，神經(jīng)元顯示軸突和樹(shù)突；突觸和動(dòng)作電位開(kāi)始于7天,。

4. 每3-4天用新鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一半的培養(yǎng)基,。

四、細(xì)胞鍍96孔板：

1. 用NbActiv1™以0.2ml/cm2稀釋細(xì)胞,，并以10,000個(gè)細(xì)胞/孔（SD）和35,000個(gè)細(xì)胞/孔（C57/BL6）或所需的濃度進(jìn)行平板稀釋

濃度,。

2. 將鋼板放在工作臺(tái)頂部（而不是在引擎蓋下），并將邊緣用薄膜包裹15-20分鐘,，使其均勻沉降。

3. 除去副膜,，37℃,，5% CO2, 9% O2, 95%濕度（或環(huán)境O2）孵育。

4. 4天后,，神經(jīng)元顯示軸突和樹(shù)突,；突觸和動(dòng)作電位開(kāi)始于7天。

5. 每3-4天用新鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一半的培養(yǎng)基。

五,、可行性分析:

1. 用37℃HBSS （0.2ml/cm2底物）沖洗兩次,。

2. 用15mg/ml雙醋酸熒光素的丙酮原液和4.6mg/ml碘化丙啶的水原液配制染料混合物。

將每種15µl稀釋到1.5ml HBSS中（1:100稀釋）,。

3. 在步驟1中加入的0.2ml HBSS中加入20µl染料混合物（1:10稀釋）,。

4. 約1分鐘后，使用適合熒光素?zé)晒獾乃{(lán)色激勵(lì)（綠色細(xì)胞）計(jì)數(shù)活細(xì)胞,。計(jì)數(shù)死細(xì)胞

綠色激發(fā)為碘化丙啶熒光（小紅核）,。

5. 生存能力=（綠色細(xì)胞/單位面積）/（總細(xì)胞數(shù)/單位面積）或生存=綠色細(xì)胞/（綠色+紅色細(xì)胞）。

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