一,、PEG是什么,?
PEG,聚乙二醇是一種高分子聚合物,,無刺激性,,味微苦,具有良好的水溶性,,并與許多有機物組分有良好的相溶性,。具有優(yōu)良的潤滑性、保濕性,、分散性,、粘接性,可作為抗靜電劑及柔軟劑等使用,,在化妝品、制藥,、化纖,、橡膠、塑料,、造紙,、油漆、電鍍,、農(nóng)藥,、金屬加工及食品加工等行業(yè)中均有極為廣泛的應(yīng)用。其分子式為HO(CH2CH2O)nH,,其中n代表聚合度,,決定了PEG的分子量。PEG具有良好的水溶性,、無毒性,、生物相容性和化學(xué)穩(wěn)定性,這些特性使得PEG在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用,。
二,、PEG在核酸提取中的作用機制
1,、促進核酸凝聚
PEG在核酸提取中的主要作用之一是促進核酸的凝聚。在高鹽濃度(如NaCl)存在下,,PEG能夠與核酸分子相互作用,,使核酸從水化的線狀構(gòu)象轉(zhuǎn)變?yōu)榫o湊的球狀構(gòu)象。這種構(gòu)象轉(zhuǎn)變暴露出核酸分子表面的負(fù)電荷磷酸基團,,增加了核酸分子之間的靜電相互作用,,從而促進核酸的凝聚和沉淀。
2,、增強核酸與固相載體的結(jié)合
在核酸提取過程中,,常常使用磁珠、硅膠等固相載體來吸附和純化核酸,。PEG的加入能夠增強核酸分子與固相載體之間的結(jié)合力,。具體來說,PEG能夠通過與核酸分子表面的負(fù)電荷磷酸基團和固相載體表面的正電荷基團(如氨基)形成離子橋,,從而牢固地將核酸分子吸附在固相載體上,。
3、減少非特異性吸附
在核酸提取過程中,,除了目標(biāo)核酸分子外,,還常常存在許多非特異性成分(如蛋白質(zhì)、多糖等),。這些非特異性成分可能會與固相載體結(jié)合,,影響核酸的純化效果。PEG的加入能夠在一定程度上減少這些非特異性成分與固相載體的結(jié)合,,提高核酸提取的純度,。
4、沉淀雜質(zhì)
PEG還能夠在核酸提取過程中沉淀一些雜質(zhì)成分,,如細胞碎片,、蛋白質(zhì)等。這些雜質(zhì)成分如果存在于核酸提取物中,,會對后續(xù)的分子生物學(xué)實驗產(chǎn)生干擾,。PEG通過形成高分子凝膠狀物質(zhì),將雜質(zhì)成分包裹并沉淀下來,,從而凈化核酸提取物,。
三、PEG在核酸提取中的具體應(yīng)用
1,、基于磁珠的核酸提取
在基于磁珠的核酸提取方法中,,PEG常作為重要的輔助試劑。具體步驟包括:首先,,將待提取的樣本(如血液,、組織等)裂解,,釋放出核酸分子;然后,,加入PEG和高鹽溶液,,使核酸分子凝聚并暴露出負(fù)電荷磷酸基團;接著,,加入帶有正電荷基團的磁珠,,通過離子橋作用將核酸分子吸附在磁珠上;最后,,通過磁場作用將磁珠與溶液分離,,洗滌磁珠以去除雜質(zhì)成分,最后洗脫磁珠上的核酸分子,。
2,、無醇清洗液中的應(yīng)用
在一些無醇清洗液中,PEG也作為重要的成分之一,。這些清洗液主要用于去除核酸提取過程中的乙醇殘留和其他雜質(zhì)成分,。PEG通過沉淀作用將雜質(zhì)成分去除,同時避免了乙醇殘留對下游實驗的影響,。這種無醇清洗液在xinguan病毒等病原體的核酸提取中得到了廣泛應(yīng)用,。
3、片段化DNA的篩選
在下一代測序(NGS)等高通量測序技術(shù)中,,需要從樣本中提取特定大小的DNA片段,。PEG可以通過調(diào)節(jié)其濃度和反應(yīng)條件,實現(xiàn)對不同大小DNA片段的選擇性吸附和純化,。具體來說,,通過兩輪或多輪吸附過程,可以逐步去除較小或較大的DNA片段,,最終得到符合要求的特定大小DNA片段。
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