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一、前言

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在生命科學(xué)研究領(lǐng)域是must的。在科研上,，細(xì)胞培養(yǎng)基（medium）一般都會(huì)加入血清（Serum）來補(bǔ)充蛋白質(zhì)（protein）,、生長(zhǎng)因子（growth factor）或其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（nutrients）等，大部分細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)選擇使用胎牛血清（fetal bovine serum, FBS）,。近年來也陸續(xù)有多樣的血清種類,，例如：人類血小板生長(zhǎng)因子（platelet-rich plasma, PRP）、小牛血清（bovine growth serum, BGS）等,，中科百抗自研產(chǎn)品：Bestop™特級(jí)胎牛血清來源于無菌采集的健康胎牛血清,，適用于各種難培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞、難培養(yǎng)原代細(xì)胞,、部分干細(xì)胞（不包括難貼壁細(xì)胞）,，驗(yàn)證的細(xì)胞典型代表有：A2780、SK-Hep-1,；HUVEC,、神經(jīng)元細(xì)胞。

二,、無血清培養(yǎng)基介紹

經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基,、合成培養(yǎng)基后，無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢(shì),。采用無血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本，簡(jiǎn)化分離純化步驟,，避免病毒污染造成的危害,。無血清培養(yǎng)基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白組分,。雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的wanquan培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求,，但對(duì)有些實(shí)驗(yàn)卻不適合，如觀察一種生長(zhǎng)因子對(duì)某種細(xì)胞的作用,，這時(shí)需要排除其他生長(zhǎng)因子的干擾作用,。而血清中可能含有各種生長(zhǎng)因子；又如需要測(cè)定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中分泌某種物質(zhì)（抗體,、生長(zhǎng)因子）的能力,；或者要大規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞，以獲得它們的分泌產(chǎn)物,。因此研制出無血清培養(yǎng)基一直是生物科學(xué)工作者努力的目標(biāo),。如有需要無血清培養(yǎng)基，請(qǐng)聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司,。

三、無血清培養(yǎng)基的基本配方

基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。

用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),，多數(shù)呈貼壁生長(zhǎng)或兼性貼壁生長(zhǎng),；而當(dāng)其在無血清、無蛋白培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí),，由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白,、層粘連蛋白、膠原,、玻表粘連蛋白,，細(xì)胞往往以懸浮形式生長(zhǎng)。

添加組分包括以下幾大類物質(zhì)：

(1）促貼壁物質(zhì)

許多細(xì)胞必須貼壁才能生長(zhǎng),，這種情況下無血清培養(yǎng)基中一定要添加促貼壁和擴(kuò)展因子,，一般為細(xì)胞外基質(zhì)，如纖連蛋白,、層粘連蛋白等,。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子，對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分化,，起著重要作用,。纖連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化，這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞,、肉瘤細(xì)胞,、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞,、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞,、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等,。

(2）促生長(zhǎng)因子及激素

針對(duì)不同細(xì)胞添加不同的生長(zhǎng)因子,。激素也是刺激細(xì)胞生長(zhǎng)、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì),，有些激素是許多細(xì)胞bi要的,，胰島素。

(3）酶抑制劑

培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,，需要用胰酶消化傳代,，在無血清培養(yǎng)基中須含酶抑制劑，以終止酶的消化作用,，達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的,。常用的是大豆胰酶；抑制劑,。

(4）結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白

常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白,。牛血清白蛋白的添加比較大,，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷,。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白,。

(5)  微量元素

硒是最常見的。

四,、使用方法

目前,，血清仍是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中最基本的的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或者細(xì)胞生長(zhǎng)狀況不良時(shí),，常常會(huì)先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),，待細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛以后，再換成無血清培養(yǎng)液,。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個(gè)適應(yīng)過程,，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%,，3%,，1%，直至無血清培養(yǎng),。在降低過程中要注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生變化,，是否有部分細(xì)胞死亡，存活細(xì)胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等,。在實(shí)驗(yàn)后這些細(xì)胞一般不再繼續(xù)保留,，很少有細(xì)胞能夠長(zhǎng)期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前,，要留有種子細(xì)胞,，種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化,。