一、前言
在質(zhì)粒提取中,，其原理是基于生物大分子在物理和化學(xué)性質(zhì)上的差異,，通過(guò)變性,、復(fù)性,、沉淀和純化等實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行區(qū)分、提取,。蛋白質(zhì)在堿性環(huán)境下容易發(fā)生變性,，使用 SDS (十二烷基硫酸鈉)等去垢劑破壞細(xì)胞膜時(shí)，SDS 與蛋白質(zhì)發(fā)生變性,，形成復(fù)合物,，使其沉淀；RNA 通常會(huì)加入 RNase 降解 RNA,，但一般 RNase 的加入時(shí)間通常在細(xì)菌/細(xì)胞裂解之后,、質(zhì)粒 DNA 純化之前，以確保 RNA 被充分降解,；最關(guān)鍵的問(wèn)題是: 如何將染色體 DNA 和質(zhì)粒 DNA 區(qū)分出來(lái),？
二、如何區(qū)分染色體DNA和質(zhì)粒DNA
細(xì)菌沒(méi)有細(xì)胞核,，只有一個(gè)擬核(nucleoid),，而染色體 DNA 是環(huán)狀的，但并非裸露的,，上面結(jié)合有多種 NAPs(nucleoid-associated proteins),。NAPs 和基因轉(zhuǎn)錄活性可以改變擬核的形態(tài)結(jié)構(gòu)。這樣的話,，質(zhì)粒 DNA 就要簡(jiǎn)單很多,，游離于細(xì)胞質(zhì)中，以共價(jià)閉環(huán) cccDNA(convalently closed circular DNA)的形態(tài)存在,。
在強(qiáng)堿和 SDS 的條件下,，染色體 DNA會(huì)被降解成線性片段并發(fā)生變性,。當(dāng)加入中和液(如醋酸鈉)后，染色體 DNA 雖然會(huì)復(fù)性,，但無(wú)法恢復(fù)其原始的雙鏈結(jié)構(gòu),，而是形成一團(tuán)纏繞在一起無(wú)法溶解的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)高速離心,，這些變性的染色體 DNA 會(huì)與 SDS-protein 復(fù)合物一起沉淀到管底,，從而與質(zhì)粒 DNA 分離；然后在強(qiáng)堿環(huán)境下,，質(zhì)粒 DNA雖然也發(fā)生一定程度的變性,，但其兩條互補(bǔ)鏈仍會(huì)緊密盤(pán)繞在一起，保持雙鏈結(jié)構(gòu),，加入中和液后,，質(zhì)粒 DNA 能夠迅速?gòu)?fù)性，恢復(fù)其天然的雙鏈結(jié)構(gòu),，并以溶液狀態(tài)存在于上清液中,，通過(guò)后續(xù)純化步驟(過(guò)柱或磁珠吸附)，可以進(jìn)一步獲得高純度的質(zhì)粒 DNA,。
三,、有關(guān)質(zhì)粒的產(chǎn)品推薦
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