一、產(chǎn)品背景
在研究項目中,，當向外部來源運送樣本或從外部來源運送樣本時,，或者需要在不同時間收集樣本時，或者僅僅是當樣本不能一次全部處理時,，通常需要儲存新鮮器官和固體組織樣本,。在這些情況下，短期儲存可以充分靈活地在幾天內(nèi)對組織進行進一步處理,。為了從儲存的組織中分離活細胞,，必須避免在儲存期間出現(xiàn)壞死和凋亡。此外,，必須防止細胞活化,，以及細胞多能性的變化，以保持細胞的生理和功能狀態(tài),。一種常見的儲存方法是冷凍組織樣本,，但這經(jīng)常導致解凍后的細胞死亡率很高，并且對運輸構成挑戰(zhàn)。
為了克服所有這些問題,，美天旎專門開發(fā)了MACS組織保存液,，它可以在2-8°C下將新鮮固體組織最佳儲存至少48小時。在此存儲期內(nèi),，細胞的活力,、功能和激活狀態(tài)得以保存，并防止細胞應激相關基因的誘導,。MACS組織保存液已經(jīng)過多種人類和小鼠組織的測試,，包括腫瘤、肺,、脾,、腦和骨骼肌。
二,、材料與方法
1. 腫瘤儲存
收集小鼠CT26腫瘤并切成大小相似的塊,。將等量的腫瘤切片分別放入裝有5 mL MACS組織保存液的兩個15 mL試管中,，于2-8℃保存24和48小時,。在每個zhi定的時間點，新鮮和儲存的腫瘤片以相同的方式處理,。
2. 腫瘤分離
使用帶加熱器的gentesmacs™ Octo解離器和Tumor Dissociation Kit, mouse根據(jù)說明書解離腫瘤,。解離后，獲得的單細胞懸浮液使用MACS Smart Strainers(70µm)過濾,。其中一部分細胞用于流式細胞術分析,，其余細胞保存在RLT緩沖液(Qiagen)中，待進一步處理用于基因表達分析,。
3. 流式細胞術分析
使用以下抗小鼠RE Afinity®抗體流式細胞術分析TIL群體:CD45 (REA737),、CD3 (REA614)、CD25 (REA568),、CD69 (REA937),、CD4 (REA604)、CD8a (REA601),、CD19 (REA749),、CD80 (REA983)和CD86 (REA1190)。使用MACSQuant®Analyzer 10對樣品進行分析,。碘化丙啶用于排除死細胞,。死細胞排除后，從門控CD45+活細胞中分析TIL群體,。
4. 基因表達分析
使用RNeasy®Mini Kit (Qiagen)從新鮮和儲存的細胞中分離RNA,。使用Qiagen公司的RT2第一鏈試劑盒(RT2 First Strand Kit, Qiagen)生成cDNA，并使用Qiagen公司的RT2 Profiler®PCR陣列(Stress and Toxicity PathwayFinder®,，小鼠)和GeneGlobe®分析工具分析基因表達,。
三,、結果
MACS組織保存液可保存細胞活力和TIL群體組成長達48小時，CT26腫瘤在收集當天或在MACS組織保存液中儲存24和48小時后處理,。分離后,，流式細胞術分析TILs的總細胞活力和組成。在新鮮和儲存的樣品中,，細胞活力均超過85%(圖1A),。此外，TILs的組成也隨著時間的推移而保持不變(圖1B),。通過分析活化標記CD25,、CD69、CD80和CD86在特定TIL群體中的表達,，發(fā)現(xiàn)細胞的活化狀態(tài)也得以保存,。
圖1:CT26小鼠腫瘤在MACS組織中4°C保存
儲存液24或48 h。解離后,，流式細胞術分析細胞總活力(A)和TIL組成(B),。細胞頻率參照活細胞CD45+。另外,，CD3+和CD19+細胞子集的頻率分別指對應的親本CD3+和CD19+群體,。
在MACS組織保存液中，細胞應激相關基因的表達被阻止,，分子分析的主要關注點是儲存條件誘導細胞應激和基因表達的變化,。這是通過分析細胞應激途徑相關基因的表達來研究的。將儲存樣品的基因表達與新鮮樣品進行比較,。在儲存24或48小時后,，細胞中未觀察到細胞應激相關基因的表達發(fā)生重大變化，基因表達與新鮮樣品細胞相當(圖2),。
圖2:新鮮腫瘤和儲存腫瘤細胞中細胞應激相關基因的表達情況,。從新鮮和儲存的CT26腫瘤細胞中分離RNA，分析細胞應激相關基因的表達,。熱圖顯示了與新鮮組織相比表達率的倍增變化,。
四、結論
• MACS組織保存液是一種強大而方便的解決方案,，適用于不同組織樣品和器官的短期儲存,。
• 細胞活力、細胞成分和細胞激活狀態(tài)可保存至少48小時,。
• 最后,，MACS組織保存液可以防止細胞應激反應，因為與新鮮樣品材料相比，細胞應激相關基因表達水平的變化保持在最di水平,。
更多有關美天旎MACS組織保存液的介紹,，請聯(lián)系美天旎代理——天津益元利康生物科技有限公司！
4
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務