活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng),,逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)得到純而壯的培養(yǎng)物,即獲得活力旺盛的,、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復(fù)壯過(guò)程,,因?yàn)楸4鏁r(shí)的條件往往和培養(yǎng)時(shí)的條件不相同,所以要活化,,讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境,。那么你知道細(xì)菌活化的操作流程是什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧,!
1. 在無(wú)菌操作下,,用無(wú)菌微量吸管,從已溶解的管中吸取50μL(或1-2滴)的菌液,,滴入固態(tài)培養(yǎng)基(培養(yǎng)基編號(hào)及溫度示于菌株訂購(gòu)單)某一邊緣附近,,以劃線法接種于培養(yǎng)基。
2. 將接種好的培養(yǎng)基置于溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
3. 在無(wú)菌環(huán)境下,,以沾有75%酒精的棉花擦拭外管,在火焰上加熱外管之尖端,。滴數(shù)滴無(wú)菌水于加熱處,,使外管破裂,再以硬棒敲破尖端,。取出隔熱纖維紙和內(nèi)管,,以滅菌過(guò)的鑷子取出內(nèi)管之棉塞。
4. (a)適用于細(xì)菌用無(wú)菌吸管,,吸取0.3-0.5mL之液體培養(yǎng)基,,滴入內(nèi)管內(nèi),并輕微震蕩(可用該吸管協(xié)助),,直到均勻懸浮,。
(b)適用于霉菌、酵母菌用無(wú)菌吸管,,吸取0.3-0.5mL無(wú)菌水,,滴入內(nèi)管內(nèi),,待干燥粉末溶解后,以無(wú)菌吸管吸取并滴入約含有5ml無(wú)菌水之試管內(nèi),,輕微震蕩使其均勻后,,靜置30至60分鐘。
5. 取0.1-0.2mL之菌體懸浮液于平板培養(yǎng)基上,,做劃線分離培養(yǎng)或做成一系列之稀釋,,用無(wú)菌L型玻棒均勻涂抹,以檢驗(yàn)菌種之純度及活化情形,,而剩余的菌體則全部移入液體培養(yǎng)基內(nèi),,并依溫度培養(yǎng)之。
6. 某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后,,遲滯期(lagperiod)較長(zhǎng),,必須等培養(yǎng)二倍時(shí)間后才能長(zhǎng)出,且再經(jīng)過(guò)一,、二次繼代培養(yǎng)(Subculture)后才能正常生長(zhǎng),。經(jīng)過(guò)以上的努力后仍培養(yǎng)失敗,才視為不能活化,。
7. 未開(kāi)封之冷凍干燥管,,請(qǐng)冷藏于4℃冰箱,切勿冷凍保存,。
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