細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái),這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。既可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,,又起到了細(xì)胞保種的作用。那么你知道細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng)有什么嗎,?讓我們一起來(lái)看看吧,!
1. DMS0稀釋時(shí)會(huì)產(chǎn)生巨大的熱量,不能直接添加到細(xì)胞液中,,需預(yù)先配制,,且DMSO必須是細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別的;
2. 緩慢冷凍,,使細(xì)胞逐漸脫水,,以免因形成巨大的冰晶而受損;
3. 選擇生長(zhǎng)良好,、密度約為80-90%,、活力超過(guò)90%的細(xì)胞進(jìn)行凍存;
4. 當(dāng)細(xì)胞密度低于5x105個(gè)活細(xì)胞/mL時(shí),,復(fù)蘇成功的幾率較低,;
5. 不宜長(zhǎng)時(shí)間將細(xì)胞保存在-80°C的冰箱中。我們建議將其放入液氮中保存,,并確保在-80°C的冰箱中保存的時(shí)間不超過(guò)48小時(shí),;
6. 在凍存細(xì)胞操作時(shí),請(qǐng)佩戴防護(hù)眼鏡和手套,,以免受到液氮的凍傷,;
7. 務(wù)必?cái)Q緊凍存管的蓋子,以免在復(fù)蘇過(guò)程中滲水,,導(dǎo)致支原體污染;
8. 定期檢查液氮儲(chǔ)備,,確保所有細(xì)胞浸沒(méi)在液體之下,;
9. 在每個(gè)凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱和凍存時(shí)間,并記錄在冊(cè),,以避免取錯(cuò)細(xì)胞或找不到凍存管的情況發(fā)生,;
10. 在-20°C的冰箱中將細(xì)胞放置的時(shí)間不應(yīng)超過(guò)1小時(shí),以防止冰晶過(guò)大而損壞細(xì)胞。
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