產(chǎn)品名稱：尿液DNA提取試劑盒（離心柱）
產(chǎn)品貨號：TD361-50 (50 次反應(yīng))
產(chǎn)品亮點(diǎn)：
從高達(dá)40毫升的尿液中輕松地純化細(xì)胞DNA/cell-free DNA,。
試劑盒配套的尿液穩(wěn)定劑(UCB)可以使DNA在室溫下穩(wěn)定保存長達(dá)1個月,。
純化柱設(shè)計確保DNA適用于所有敏感的下游應(yīng)用，包括PCR,、DNA測序,、芯片和DNA甲基化分析等
技術(shù)簡介：
樣品來源-尿液樣本，每次制備最多40ml的尿液,。如有需要,，樣品體積可按比例增加或減少。
DNA質(zhì)量-高質(zhì)量的DNA可用于下游應(yīng)用,，如PCR,、亞硫酸鹽處理/甲基化檢測、芯片等,。
DNA產(chǎn)量-柱子的DNA結(jié)合容量為5 u8,。請注意，DNA產(chǎn)量可能會因尿液本身而異,。女性尿液通常比男性尿液產(chǎn)生更多的DNA,。健康女性個體的尿液DNA平均范圍為6-1000ng/ml。健康男性個體的DNA平均范圍2-20ng/ml
DNA大小-能夠從100 bp到23 kb恢復(fù)DNA片段,。
所需設(shè)備-離心機(jī),、微離心機(jī)和熱塊/水浴。
緩沖液制備：
將48ml100%乙醇(52ml95%乙醇)加入12ml尿液DNA洗滌緩沖液2中,，添加好乙醇后在試劑瓶上做好標(biāo)記,！
選擇性添加項(xiàng):如遇難處理樣品,，可以考慮向基因組DNA裂解液中加入B-巰基乙醇(用戶自備)，最終稀釋為0.5%(v/v),，即每50ml加入250微升
實(shí)驗(yàn)流程：
從≤40ml的樣品中提取 DNA
除非特殊說明,，一般在常溫(15-30°C)進(jìn)行以下操作步驟。 以下操作步驟分 3 個部分:(A)總DNA(細(xì)胞內(nèi)和游離)沉淀
(B)蛋白消化
(C)DNA 純化,。
(A)總DNA(細(xì)胞內(nèi)和游離)沉淀
(如果只需要細(xì)胞內(nèi)或者游離的 DNA,操作步驟見附錄)1.將 40ml 的尿液轉(zhuǎn)移到合適的離心管內(nèi),。
注:如果處理≤1毫升的尿液，請使用微離心管,。
如果處理>1毫升至14毫升的尿液,，請使用15毫升的錐形管。
如果處理>14毫升至40毫升的尿液,，請使用50毫升的錐形管,。
2.添加 70ul 的尿液穩(wěn)定劑到每 1m!的樣品中,，渦旋混勻,。(例如 350ul 的尿液穩(wěn)定劑到 5ml的尿液樣品中)
添加了穩(wěn)定劑的尿液可以在室溫下最長保存 1 個月，需要提取核酸時,，將添加了穩(wěn)定劑的尿液渦旋振蕩,，混勻。
如果處理≤14ml的尿液添加 10ul純化珠(使用之前需要渦旋混勻)3.
如果處理 14-40m!的尿液,，需要添加 20ul 純化珠(使用之前需要渦旋混勻),。
4.在 3，000xg 下離心 15 分鐘,。收集細(xì)胞沉淀,。操作方案：
以下離心操作步驟的離心力均在 10,000 - 16,000 x g 之間進(jìn)行。
1. 使用刀片或手術(shù)刀把 DNA 片段從瓊脂糖凝膠上切除下來并且移置到 1.5 ml 小型離心管內(nèi).
Note: 從凝膠上切下的瓊脂糖盡可能的要少.
2. 將 3 倍體積的 溶膠液 添加到每 1 體積從凝膠上切下的瓊脂糖切塊中.
Example:對 于 200 µl (mg) 的 瓊 脂 糖 凝 膠 切 塊 ,， 添 加 600 µl 的 ADB 緩沖液.
3. 在 37-55℃ 下溫水浴 10~20 分鐘直到凝膠切塊溶解.
Note: 確定凝膠切塊溶解是很重要的步驟. 在溫水浴過程中可輔以溫和的攪拌有助于凝膠的溶解,。 如果 DNA 大小超過 8kb ，加熱之后需要額外添加等量膠塊體積的水,。例如： 200 µl (mg) 的瓊脂糖凝膠切塊,，添加 600 µl 的 ADB 緩沖液.加熱之后添加 200µl 的水。
4. 將溶解的瓊脂糖切塊溶液放到 2 號柱 中并把柱套在 收集管 里.
5. 離心 1 分鐘. 去除濾出液. Note: 柱所能容納的樣品體積為 800 µl. 所以, 如果樣品體積超過 800 µl 時,，柱就要被多次填充和離心,。
6. 添加 200 µl 的 DNA 洗滌液 到柱中離心 1 分鐘，去除濾出液.
7. 重復(fù)第 6 步洗滌步驟.
8. 可選步驟：將收集管中的廢液倒掉,，并將 2 號柱套回收集管中額外離心2 分鐘,，盡量除去洗滌液，以免洗滌液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng),。
9. 直接添加 25 µl DNA 洗脫液到柱基質(zhì)中. 將柱套在 1.5 ml 離心管中離心 1 分鐘來洗脫
DNA.Note :從柱中洗脫出的 DNA 產(chǎn)量與 pH 和溫度有關(guān). 如果使用水來洗脫,， 確保 pH 是>6.0. 在向柱中加入水后靜置 1 分鐘可增加較大 (> 6 kb) DNA 的產(chǎn)量.在 60-70 oC 的水中洗脫 DNA 可增加較大DNA(> 10 kb)的產(chǎn)量
Note: 如果試驗(yàn)需要的話 TE 緩沖液 (10 mM Tris-HCl,， 1 mM EDTA， pH 8.0) 或改進(jìn)的TE (10 mMTris-HCl,， 0.1 mM EDTA,， pH 8.5) 也可用來洗脫.
在水中得到的超純 DNA 可進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn).
歡迎訂購：
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
TD720- 50 | 尿液DNA提取試劑盒（離心柱） | 50次 |
天津益元利康生物科技有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)簡石生物尿液DNA提取試劑盒（離心柱）（TD361），歡迎選購,！
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
4
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)