感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率高達(dá) 108 cfu/µg,，具鏈霉素抗性，其轉(zhuǎn)化后單菌落的生長數(shù)多,，生長速度比 DH5α 略快,，相同培養(yǎng)時間內(nèi)生長的菌斑略大于DH5α。適用于高效的 DNA 克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增,。能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制,。
操作步驟：
使用前請先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽,。
1. 柱平衡步驟：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL,，12,000 rpm（~13,400×g）離心1 min，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管中,。（使用當(dāng)天處理過的柱子）
2. 取1-5 ml過夜培養(yǎng)的菌液加入離心管中，12,000rpm （~13,400×g）離心1 min,，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）,。
3. 向留有菌體沉淀的離心管中加入250μI溶液P1（請先檢查是否已加入RNase A），使用移液器或渦旋振蕩器徹di懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀,。
注意：如果有未徹di混勻的菌塊,，會影響裂解，導(dǎo)致提取量和純度偏低,。
4. 向離心管中加入250μl溶液P2,，溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解。
注意：溫和地混合,，不要劇烈震蕩,，以免打斷基因組DNA，造成提取的質(zhì)粒中混有基因組DNA片斷,。此時菌液應(yīng)變得清亮粘稠,，所用時間不應(yīng)超過5min，以免質(zhì)粒受到破壞,。如果未變得清亮,，可能由于菌體過多，裂解不徹di,，應(yīng)減少菌體量,。
5. 向離心管中加入350μl溶液P3,，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次,，充分混勻，此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀,。12,000rpm（~13,400×g）離心10min,，用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到過濾柱CS（過濾柱放入收集管中）,，注意盡量不要吸出沉淀。
注意：P3加入后應(yīng)立即混合,，避免產(chǎn)生局部沉淀,。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清,。
6. 12,000 rpm（~13,400×g）離心2 min,，小心地將離心后收集管中得到的溶液轉(zhuǎn)移到吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），（如果過濾柱中有殘余的液體說明步驟5吸取的上清中雜質(zhì)過多,，可以延長離心的時間,；如果離心后收集管底部有少量的沉淀，盡量的吸取上清）,。
7. 12.000 rpm （~13,400×g）離心30-60 sec,，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP3放入收集管中,。
8.向吸附柱CP3中加入500μl去蛋白液PD,，12,000rpm （~13.400×g）離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱CP3放入收集管中,。
9. 向吸附柱CP3中加入600μl漂洗液PW（請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）離心30-60 sec,，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱CP3放入收集管中。
10.重復(fù)操作步驟9,。
11.將吸附柱CP3放入收集管中,，12,000 rpm（~13,400×g）離心2 min，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,。
注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切,、PCR等）實驗。為確保下游實驗不受殘留乙醇的影響,，建議將吸附柱CP3開蓋,，置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹di晾干吸附材料中殘余的漂洗液,。
12.將吸附柱CP3置于一個干凈的離心管中,，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-100μI洗脫緩沖液TB，室溫放2min,12,000rpm（~13,400×g）離心2min,，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中,。
注意：為了增加質(zhì)粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,，重復(fù)步驟12,。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響,。若用ddH20做洗脫液，應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi),，pH值低于7.0會降低洗脫效率,。洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50μl，體積過小影響回收效率,。且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20°C,，以防DNA降解。
產(chǎn)品選購：
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
CB104-01 | 感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100 μl |
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