該感受態(tài)細胞用于以 T7 RNA 聚合酶為表達系統的高效外源基因的蛋白表達宿主,。T7 噬菌體 RNA 聚合酶基因的表達受控于λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動子,，該區(qū)整合于 BL21 的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達,。轉化效率可達 107 cfu/µg,。
本公司生產的BL21(DE3)感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌BL21(DE3)菌株經特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA的化學轉化,。使用pUC19質粒檢測,，轉化效率可達10’cfu/ug，-90~-65℃保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變,。
操作方法：
1.取感受態(tài)細胞置于冰浴中,，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中,，置于冰浴中,。
注意:一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 ，可以根據實際情況分裝使用,。應注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一,。
2.向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(100μl的感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和)，輕彈混勻,，在冰浴中靜置30 min,。
3.將離心管置于42℃水浴中放置60-90 sec，然后快速將管轉移到冰浴中,，使細胞冷卻2-3 min,，該過程不要搖動離心管,。
注意:此步驟也可將離心管置于室溫進行，時間不需十分準確,，夏季或室溫較高時,，可放置5-8 min左右:如果室溫較低，可延長時間至8-15 min左右,。條件允許建議使用42℃℃熱激方法,。
4.向每個離心管中加入900μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)45 min(150 rpm),，目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,，使菌體復蘇。
5.將離心管內容物混勻,，吸取100 μl已轉化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,，倒置平板,，37C培養(yǎng)12-16 h。
注意:涂布用量可根據具體實驗來調整,。如轉化的DNA總量較多,，可取更少量轉化產物涂布平板;反之，如轉化的DNA總量較少,，可取200-300μI轉化產物涂布平板,。如果預計的克隆較少，可通過離心(4000 rpm,2 min)后吸除部分培養(yǎng)液,，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中,。(涂布剩余的菌液可置于4°C保存，如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
注意事項：
1.感受態(tài)細胞應保存在-90~-65℃,，不可凍融和放置時間過長,，以避免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。
2.進行轉化操作時,，應根據相應溫度及無菌條件的要求進行,。
3.為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液,，以重新轉化,，將損失降到zui低。
產品選購：
貨號 | 產品名稱 | 規(guī)格 |
CB105-02 | BL21(DE3)感受態(tài)細胞 | 10×100 μl |
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