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碧云天的脂質(zhì)氧化MDA檢測(cè)試劑盒（Lipid Peroxidation MDA Assay Kit）是一種用于測(cè)量脂質(zhì)氧化水平的試劑盒。它采用一種基于MDA和硫代ba比妥酸（thiobarbituric acid, TBA）反應(yīng)的顯色方法來產(chǎn)生紅色產(chǎn)物,，然后通過比色法對(duì)血漿,、血清、尿液,、動(dòng)植物組織或細(xì)胞裂解液中的MDA進(jìn)行定量檢測(cè)。這種試劑盒被廣泛應(yīng)用于脂質(zhì)氧化水平的檢測(cè),。

MDA（丙二醛）是生物體脂質(zhì)氧化的天然產(chǎn)物,。當(dāng)動(dòng)物或植物細(xì)胞經(jīng)受氧化應(yīng)激時(shí)，脂質(zhì)氧化便發(fā)生,。脂肪酸在氧化過程中會(huì)逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物,，其中包括MDA。通過測(cè)量MDA的水平,，我們可以了解脂質(zhì)氧化的程度，因此MDA的測(cè)定被廣泛用作脂質(zhì)氧化水平的指標(biāo),。除了氧化應(yīng)激反應(yīng)外,，生物體內(nèi)的其他生化反應(yīng)也會(huì)產(chǎn)生MDA，例如thromboxane synthase也能催化其產(chǎn)生,，但只要在測(cè)定時(shí)設(shè)置適當(dāng)?shù)膶?duì)照,，就能觀察到脂質(zhì)氧化水平的變化,。

以碧云天的脂質(zhì)氧化MDA檢測(cè)試劑盒（Lipid Peroxidation MDA Assay Kit）為工具，通過檢測(cè)MDA水平，可以準(zhǔn)確評(píng)估生物體的脂質(zhì)氧化程度,。這種試劑盒符合脂質(zhì)氧化水平檢測(cè)的需要,，并且在科學(xué)研究和臨床應(yīng)用中得到廣泛應(yīng)用。

使用說明：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 血漿,、血清或尿液樣品制備后可以直接用于MDA測(cè)定,。

b. 組織或細(xì)胞可以使用PBS裂解液進(jìn)行勻漿或裂解,。對(duì)于組織,，組織重量占勻漿液或裂解液的比例為10%,；對(duì)于細(xì)胞,，每100萬細(xì)胞使用0.1ml裂解液或勻漿液。勻漿或裂解后,，10,000g-12,000g離心10分鐘取上清用于后續(xù)測(cè)定,。對(duì)于一些特殊樣品，離心不能獲得澄清的上清溶液的,，可以使用0.2微米孔徑的過濾器過濾以獲得澄清的樣品溶液,。勻漿或裂解等樣品制備步驟宜在冰浴或4℃進(jìn)行操作。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. TBA儲(chǔ)存液的配制：稱取適量TBA,，用TBA配制液配制成濃度為0.37%的TBA儲(chǔ)存液。例如18.5mg TBA用5ml TBA配制液配制,，或者25mg TBA用6.76ml TBA配制液配制,，最終濃度即為0.37%。TBA配制液需wan全溶解后再使用,，可以加熱到70℃以促進(jìn)溶解,。TBA儲(chǔ)存液較難溶解,，需加熱到70℃,，并通過劇烈Vortex以促進(jìn)溶解,。配制好的TBA儲(chǔ)存液室溫避光保存,，至少3個(gè)月內(nèi)有效,。

3. 樣品測(cè)定：

a. 在離心管或其它適當(dāng)容器內(nèi)加入0.1ml勻漿液,、裂解液或PBS等適當(dāng)溶液作為空白對(duì)照,，加入0.1ml上述不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，加入0.1ml樣品用于測(cè)定；隨后加入0.2ml MDA檢測(cè)工作液,。

b. 混勻后,，100℃或沸水浴加熱15分鐘。加熱時(shí)務(wù)必注意避免液體暴沸濺出,。如果使用加熱塊(Heat block)進(jìn)行加熱注意用重物壓緊離心管蓋；如果使用沸水浴,，則需使用可把蓋子鎖死的離心管或螺旋蓋離心管,，或用Parafilm封住離心管口，用針頭刺一小孔,。zui方便和準(zhǔn)確的加熱方法是使用帶有熱蓋并可以加熱0.5ml PCR管的PCR儀,。

c. 水浴冷卻至室溫，1000g室溫離心10分鐘,。取200微升上清加入到96孔板中，隨后用酶標(biāo)儀在532nm測(cè)定吸光度,。如果不方便測(cè)定532nm的吸光度,，也可以測(cè)定530-540nm之間的吸光度?？梢栽O(shè)定450nm為參考波長進(jìn)行雙波長測(cè)定,。

d. MDA含量的計(jì)算：對(duì)于血漿,、血清或尿液等樣品可以直接根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算獲得MDA的摩爾濃度，對(duì)于細(xì)胞,、或組織樣品,，計(jì)算出樣品溶液中的MDA含量后，可以通過單位重量的蛋白含量或組織重量等來表示最初樣品中的MDA含量,，例如μmol/mg蛋白或μmol/mg組織。

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