現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室研究的細(xì)胞多以原核細(xì)胞,、真核細(xì)胞為主,為了獨(dú)立研究某類細(xì)胞,,需要抑制其他類型細(xì)胞的增殖,,例如養(yǎng)293T時加青霉素/鏈霉素,抑制潛在的原核細(xì)菌增殖,,但又不影響293T的功能,。那么你知道該如何選擇實(shí)驗(yàn)抗生素嗎?讓我們一起來看看吧,!
一,、抗生素機(jī)制:
1. DNA復(fù)制:在DNA聚合酶作用下,,DNA自身得到復(fù)制,有絲分裂時每個細(xì)胞一套DNA,;
2. 轉(zhuǎn)錄,、RNA形成過程:在RNA聚合酶催化下,以DNA模板鏈合成RNA的過程,,產(chǎn)生mRNA,;
3. 蛋白合成過程:mRNA在核糖體中作為模板,tRNA運(yùn)輸氨基酸,,合成多肽或者蛋白質(zhì),;
4. 細(xì)胞膜完整性:細(xì)胞膜是防止細(xì)胞外物質(zhì)自由進(jìn)入細(xì)胞的屏障,它保證了細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的相對穩(wěn)定,,使各種生化反應(yīng)能夠有序運(yùn)行,。
5. 細(xì)胞壁完整性:原核單細(xì)胞生物需要有細(xì)胞壁,細(xì)胞壁位于菌細(xì)胞的最外層,,包繞在細(xì)胞膜的周圍,,保持細(xì)胞正常形態(tài)不受機(jī)械力、滲透壓失衡造成的細(xì)胞膜破裂,。
二,、實(shí)驗(yàn)抗生素的選擇
(1)抑制RNA的轉(zhuǎn)錄和DNA復(fù)制:抑制核酸的功能阻止了細(xì)胞分裂/或所需酶的合成,有博來霉素(Zeocin),、利福平(Rifampin)等,。
(2)干擾蛋白質(zhì)合成:干擾蛋白質(zhì)的合成中核糖體的組裝,例如競爭結(jié)合大小亞基,,抗生素包括四環(huán)素類,、鏈霉素、氯霉素(為了增加質(zhì)粒產(chǎn)量使用),、新霉素,、慶大霉素、卡那霉素,、嘌呤霉素(puromycin)。,、抑制真核細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的有遺傳霉素(G418),。
(3)破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu):一些抗菌素與細(xì)胞的細(xì)胞膜相互作用而影響膜的滲透性,這對細(xì)胞具有致命的作用,。以這種方式作用的抗生素有多粘菌素(polymyxin),、短桿菌素。
(4)抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成:抑制細(xì)胞壁的合成會導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞破裂死亡,,抗生素特征是β-內(nèi)酰胺類抗生素,,有氨芐青霉素、卡唑霉素,哺乳動物的細(xì)胞例如293T,、CHO等沒有細(xì)胞壁,,不受這些藥物的影響。
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