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百奧醫(yī)藥骨組織解離試劑盒可用于骨組織樣本單細胞懸液制備,，可廣泛應(yīng)用于高通量單細胞測序等相關(guān)科學(xué)研究實驗,。那么你知道百奧醫(yī)藥骨組織解離試劑盒的使用方法是什么嗎？讓我們一起來看看吧,！

一,、使用方法：

1、用滅菌的剪刀或手術(shù)剪將組織切成小塊

2,、在冰上將組織塊兒加入適當(dāng)?shù)腞PMI 1640培養(yǎng)基或PBS緩沖液,，清洗至少3次，去除多余xue漬和雜質(zhì)

3,、將洗干凈的組織剪碎,，剪的越碎越好，增大和消化試劑接觸的面積,。加入適量的消化試劑,。顛倒混勻。

4,、放置于酶作用的最佳溫度下,，一般37°C，進行孵育,，每隔5分鐘震蕩混勻,。

5、不同類型,、狀態(tài)的組織消化時間不同,，每隔一定的時間質(zhì)檢一次細胞懸液，根據(jù)細胞總量及活性等確定消化停止時間,。對于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織,，消化時間4~48h，對于容易消化的組織可以采用37°C 消化15-45分鐘,，也可以根據(jù)具體情況而定,。如組織塊已分散而失去塊的形狀，一經(jīng)搖動即成細胞團或單個細胞,，可以認為已消化充分,。

6、消化完成后,，用合適的細胞篩進行過濾,，收集濾液。

7,、讓細胞沉降并倒出多余的含酶液體,。

8,、用PBS緩沖液洗滌并重復(fù)2-3次。加入適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基或緩沖液,，重懸細胞,。

9、用細胞計數(shù)儀對細胞懸液進行質(zhì)控并記錄

二,、測試效果

使用該組織解離試劑盒將新鮮人骨組織消化解離為單細胞懸液,，利用CountStar全自動細胞熒光分析儀檢測細胞活性（AO/PI染色）、結(jié)團率,、活細胞濃度,、細胞直徑等參數(shù)。然后進行10x Genomics平臺單細胞建庫測序,，獲取數(shù)據(jù),。

制備的單細胞懸液質(zhì)量較高，活性可達83.85%,，結(jié)團率僅為3.35%,，其他參數(shù)也均能滿足高通量單細胞測序研究相關(guān)實驗要求。

從曲線圖,、捕獲細胞數(shù),、測序深度、獲得基因數(shù)結(jié)果初步可以看出,，數(shù)據(jù)結(jié)果比較理想,，例如基因中位數(shù)均在1,400個左右，較為理想,。

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