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在完成蛋白質(zhì)純化后,，如果保存不當(dāng)，容易發(fā)生失活和變性的情況,，那么你知道保存蛋白質(zhì)的原則及方法有哪些嗎,？讓我們一起來(lái)看看吧！

一,、原則

1. 低溫

保存蛋白質(zhì)時(shí),，確保在低溫條件下至關(guān)重要。低溫意味著較低的能量水平,，有助于減緩蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的熱運(yùn)動(dòng),，減少鍵的斷裂可能性。此外,，在低溫下,，微生物繁殖減緩，潛在的蛋白酶活性降低,，從而有助于維持蛋白質(zhì)的活性,。

2. 無(wú)菌

在進(jìn)行蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，務(wù)必佩戴手套,。盡管實(shí)驗(yàn)室戴手套通常是為了保護(hù)實(shí)驗(yàn)者自身,，但在生化實(shí)驗(yàn)中，蛋白質(zhì)是我們需要保護(hù)的主體,。我們皮膚上存在一些蛋白酶,，可能會(huì)降解蛋白樣品。此外，皮膚上的其他化學(xué)物質(zhì)也可能污染蛋白樣品,。為了防止細(xì)菌生長(zhǎng),，最好將蛋白質(zhì)保存在經(jīng)過(guò)滅菌處理的容器中。

3. 濃度

為了提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,，建議以較高濃度保存重組蛋白質(zhì),，最好保持在1mg/ml以上。高濃度有助于防止蛋白質(zhì)分子附著在塑料或玻璃管壁上,。不容忽視的是,，疏水性蛋白質(zhì)容易附著在管壁上。

4. 分裝

蛋白質(zhì)需要冷凍保存,，但在實(shí)驗(yàn)中常在室溫或更高溫度使用,。反復(fù)凍融過(guò)程中產(chǎn)生的冰晶會(huì)損害蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象。為減少凍融次數(shù),，建議將純化后的蛋白質(zhì)進(jìn)行分裝保存,，每次使用前融化所需量，以確保蛋白質(zhì)樣品經(jīng)歷單次凍融,。

二,、保存

1. 長(zhǎng)期保存

對(duì)于凍干狀態(tài)的重組蛋白，由于處于wan全脫水的狀態(tài),，在不受潮的情況下可以在冰箱中保存數(shù)年,。

對(duì)于復(fù)融后的重組蛋白，比較合適的保存方式是分裝后保存在 -20°C 或 -80°C,，六個(gè)月內(nèi)一般是沒(méi)有問(wèn)題的,。

（1）分裝有助于zui大程度減少反復(fù)凍融對(duì)抗體和重組蛋白活性的損害，并減少?gòu)耐还苤卸啻挝】赡軐?dǎo)致的污染,。

（2）分裝的量最好按一次實(shí)驗(yàn)用完為準(zhǔn),，每份至少不能少于10 µl。體積越小,，蛋白濃度受蒸發(fā)和管壁吸附影響的可能性越大,。

（3）復(fù)融后的分裝重組蛋白如果一次用不完，將剩余母液保存在 4℃,，避免再凍起來(lái),。

（4）蛋白工作液應(yīng)當(dāng)在當(dāng)天配制并當(dāng)天使用，最好不要在4℃超過(guò)1天,。

2. 短期保存

對(duì)于短期保存,，大多數(shù)蛋白質(zhì)可以在4°C下保存，以避免反復(fù)凍融對(duì)活性的影響,。然而,，4°C保存面臨微生物污染的問(wèn)題,。因此，如果保存時(shí)間超過(guò)24小時(shí),，建議使用0.22微米的濾膜過(guò)濾樣品,，然后在無(wú)菌管中保存。值得注意的是,，并非所有蛋白質(zhì)都適合在4°C下保存。

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