了解或者做過(guò)Western Blot的同學(xué)都應(yīng)該清楚,，經(jīng)過(guò)電泳分離后的蛋白質(zhì)樣品需經(jīng)過(guò)“轉(zhuǎn)膜"步驟，將蛋白從PAGE膠轉(zhuǎn)移到膜上進(jìn)行固定后,，才能進(jìn)行后續(xù)各種方法的Western Blot的檢測(cè),。Western Blot中膜的選擇是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)中一般可以選擇硝酸纖維素膜(NC) 和PVDF膜,，PVDF膜結(jié)合能力強(qiáng)且具有較強(qiáng)的機(jī)械強(qiáng)度，可以重復(fù)使用,。那么你知道該如何使用PVDF膜嗎,？讓我們一起來(lái)看看吧！
一,、何為PVDF膜,？如何選擇PVDF膜?
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride）是蛋白質(zhì)印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的,，膜孔徑有大有小,，隨著膜孔徑的不斷減小，膜對(duì)低分子量的蛋白結(jié)合就越牢固,。大于20KDa的蛋白選用0.45μm的膜,，小于20KDa的蛋白選用0.2μm的膜。
二,、PVDF膜使用時(shí)要用甲醇浸泡嗎,？
PVDF膜在使用時(shí)需要進(jìn)行預(yù)處理，用甲醇處理的目的就是活化膜上的正電基團(tuán),，使其更容易與帶負(fù)電的蛋白結(jié)合,。PVDF膜本質(zhì)是一種疏水性的聚合物，在水溶液中不會(huì)浸濕,。為了在水性緩沖液和系統(tǒng)中使用PVDF膜,，首先必須將其浸泡在50%(v/v)或更高濃度的醇溶液中。甲醇,、乙醇和異丙醇都適合浸泡這種膜,。
三、如何確定PVDF膜轉(zhuǎn)膜成功
可以采用染色法來(lái)確定轉(zhuǎn)膜是否成功,，PVDF膜染料分2類(lèi),，可逆染料和不可逆染料,。
可逆染料在評(píng)估印跡之后可被從膜上洗掉。這些操作不干擾后續(xù)的免疫檢測(cè)或印跡上蛋白的其它分析,。zui常用的可逆蛋白染料是麗春紅,。可逆染料的主要缺點(diǎn)在于它們的靈敏度低于不可逆染料,，但是在大部分情況下并不影響使用,。
不可逆染料通常表現(xiàn)出最佳的靈敏度，但會(huì)干擾或阻止蛋白的進(jìn)一步分析,。不可逆染料有氨基黑和考馬斯亮藍(lán)等,。
四、PVDF膜的保存
在WB曝光結(jié)束后仍需要保存膜以便后續(xù)使用,，膜的保存條件是由與膜結(jié)合的蛋白的穩(wěn)定性決定的,。盡管PVDF是一種化學(xué)耐受性好的聚合物，有著出色的長(zhǎng)期穩(wěn)定性,。但是我們還是建議低溫保存,，當(dāng)然室溫對(duì)于一些蛋白也是可以的。PVDF膜在4℃下最多保存2周,，-20℃下最多2個(gè)月,，-70℃下可以長(zhǎng)期保存。
注意：保存在冰箱冷凍室的印跡膜不能受到機(jī)械沖擊,，這會(huì)導(dǎo)致膜破損,。印跡膜應(yīng)恢復(fù)到室溫后才從塑料袋中取出。印跡膜也可放在塑料袋中置于4℃,，但應(yīng)加入疊氮化na等殺菌劑,，以防止細(xì)菌生長(zhǎng)。在使用之前必須徹di洗掉疊氮化物,，以免抑制HRP的活性,。
更多有關(guān)PVDF膜的使用問(wèn)題，請(qǐng)聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司,。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
4
立即詢(xún)價(jià)
您提交后，專(zhuān)屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)