PCR技術(shù)問世已有30多年,，期間創(chuàng)新性生物技術(shù)不斷涌現(xiàn)，然而PCR技術(shù)的地位依然不可撼動,，PCR的全稱是聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction）,，簡單說來，PCR技術(shù)是利用DNA雙鏈復制的原理,，在生物體外大量擴增特定DNA片段的技術(shù),，PCR作為一項bi不可少的技術(shù)手段，仍被廣泛應用在基因克隆,、基因表達分析,、病原體檢測、疾病診斷、基因測序,、生物制藥,、基因/細胞治療、分子育種,、物種鑒定,、法醫(yī)鑒定等各個領(lǐng)域。
標準的PCR過程包括三個步驟：變性(Denaturation)——退火(Annealing)——延伸(Extension),。
一,、變性
變性是通過高溫（通常為90～95℃）破壞雙鏈DNA的氫鍵，使其變成單鏈DNA,。變性的時間和溫度會根據(jù)DNA片段的復雜程度,、GC含量、大小以及緩沖液的鹽濃度來確定,。
二,、退火
退火是指在DNA形成單鏈之后，通過降低溫度,，使引物能夠結(jié)合到單鏈DNA的目標區(qū)域上,。一般情況下，引物完成退火所需的孵育時間為0.5-2分鐘,。通過計算PCR擴增引物的熔解溫度（Tm）,，可以確定適當?shù)耐嘶饻囟龋ǔ１纫锏?/span>Tm低3-5℃,。
三,、延伸
指DNA模板--引物結(jié)合物在DNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料,，目標序列為模板,，按照堿基互補配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的鏈,。
在延伸階段,，DNA模板與引物結(jié)合物在DNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料,，在模板的指導下,，按照堿基互補配對和半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的鏈,。一般將溫度設(shè)定在70-75℃之間,，因為熱穩(wěn)定性DNA聚合酶在這個溫度下活性最佳。延伸的時間取決于DNA聚合酶的合成速度和目標DNA的長度,。當目標片段的擴增長度較長（如大于10 kb）時,，除了需要增加延伸時間,，還需降低溫度，以確保引物能在長時間循環(huán)中保持酶的活性,。另外,，假如引物退火溫度與延伸溫度相差未超過3℃，則退火和延伸溫度可合并成一步,，稱為兩步PCR法,，可取代傳統(tǒng)的三步PCR法。兩步PCR法無需在退火和延伸之間轉(zhuǎn)換和穩(wěn)定溫度,，從而縮短了PCR所需的時間,。通過重復變性——退火——延伸這三個過程，即可獲得更多的“半保留復制鏈",，而這種新鏈又能作為下個循環(huán)的模板,，不斷循環(huán)。
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