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你知道什么是二抗嗎,？讓我們一起來看看吧,！

一、二抗的定義

第二抗體（二抗）是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，即抗體的抗體,，其主要作用是檢測抗體的存在,，放大一抗的信號。二抗是利用一抗是大分子的蛋白質(zhì)具有抗原性的性質(zhì),，去免疫異種動物,，由異種動物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的針對于此抗體的免疫球蛋白。二抗針對某一特定物種（如小鼠）的所有抗體（如IgG,、IgM或IgA等）均具有反應(yīng)性,。

二、二抗的設(shè)計(jì)原理

根據(jù)同一種來源的同種亞型抗體的恒定區(qū)是保守的,，以此充當(dāng)抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體可以識別同種亞型一抗,，根據(jù)這一原理設(shè)計(jì)制備二抗。

抗IgG (H+L)恒定區(qū)：靶向一抗的重鏈和輕鏈恒定區(qū),。這些抗體也會與其他類(如IgE,、IgD等)發(fā)生反應(yīng)，因?yàn)檫@些類之間共享輕鏈,。更廣泛的表位識別(H+L)二抗使其適用于大多數(shù)需要二抗的免疫分析,。

抗IgG Fc片段或重鏈恒定區(qū)：與抗IgG (H+L)二抗不同，靶向一抗Fc區(qū)域或重鏈的二抗具有類特異性,，不會與其他類免疫球蛋白發(fā)生反應(yīng),，因?yàn)槊恳环N抗體的重鏈或者Fc片段是不一樣的（見圖2）。如果打算在Ip后進(jìn)行Western blotting分析,，建議使用重鏈特異性二抗來檢測位于25kDa分子量附近的目標(biāo)蛋白,，以避免輕鏈的干擾。此外,，F(xiàn)ab片段抗Fc二抗可用于一抗在多次標(biāo)記實(shí)驗(yàn)孵育前預(yù)標(biāo)記,。

抗IgG輕鏈恒定區(qū):靶向一抗的輕鏈(kappa或lambda)。這些抗體不與一抗重鏈反應(yīng),，但識別其他免疫球蛋白類的共享輕鏈,。例如，山羊抗人IgG Kappa輕鏈二抗不僅能識別IgG亞類,，還能識別IgA,、IgD、IgE,、IgM等輕鏈,。在Ip后進(jìn)行Western blotting分析時，建議使用輕鏈特異性二抗來檢測來檢測位于55kDa分子量附近的目標(biāo)蛋白,，以避免重鏈的干擾,。

抗IgG F(ab’)2片段恒定區(qū)：靶向于一抗的F(ab’)2片段區(qū),。由于識別了F(ab)區(qū)域的共享輕鏈，它們會與IgA,、IgD,、IgE,、IgM等輕鏈發(fā)生反應(yīng),。

三、二抗的優(yōu)勢

與僅使用標(biāo)記一抗直接檢測目標(biāo)物相比,，使用二抗識別一抗間接檢測目標(biāo)物具備多種優(yōu)勢,。

通用性：二抗針對某一特定物種（如小鼠）的所有抗體均具有特異性，因而使用標(biāo)記的二抗可以免去對每一個一抗進(jìn)行標(biāo)記,，大大節(jié)省了時間和費(fèi)用,。

放大信號：一個一抗分子可以同時結(jié)合幾個標(biāo)記二抗分子，從而增強(qiáng)信號并提高檢測靈敏度,。在有些檢測中,，可使用生物素化的二抗和鏈霉親和素偶聯(lián)的標(biāo)記分子來進(jìn)一步增強(qiáng)信號。

允許進(jìn)行多重檢測實(shí)驗(yàn)：由于二抗具有物種特異性,，因此可以將實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為使用源自不同物種的一抗來檢測多種目標(biāo)物,。使用與具有不同波長發(fā)射光的熒光染料標(biāo)記的二抗來檢測不同的目標(biāo)物。

保留互補(bǔ)位：一抗與標(biāo)記分子的偶聯(lián),，有可能會影響其抗原結(jié)合位點(diǎn),，也稱為互補(bǔ)位。這將降低一抗與其靶抗原結(jié)合的能力,。使用標(biāo)記二抗后,，可以在檢測中使用未偶聯(lián)的一抗而避免影響其與抗原的結(jié)合。

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