細胞培養(yǎng)物污染往往是細胞培養(yǎng)實驗室中最常見的問題,,有時會造成非常嚴重的后果,。細胞培養(yǎng)污染物可分為兩大類,一類是化學污染物,,如培養(yǎng)基、血清和水中的雜質,,包括內毒素,、增塑劑和洗滌劑,另一類是生物污染物,,如細菌,、霉菌、酵母,、病毒和支原體,,以及其他細胞系的交叉污染,。那么我們該如何分辨各種細胞污染呢?讓我們一起來看看吧,!
一,、細菌污染
肉眼觀察特點:細菌污染時細胞培養(yǎng)基可能在幾個小時呈現(xiàn)混濁,爆發(fā)很快,。有時稍加震蕩,,便會有很多混濁物漂起。
在低倍顯微鏡下,,細菌以細小顆粒的形式出現(xiàn)在細胞之間,,在高倍顯微鏡下觀察可以分辨出單個細菌的形狀。
二,、真菌污染
常見的真菌有煙曲霉,、黑曲菌、白色念珠菌和酵母菌,。真菌污染時細胞培養(yǎng)液一般不會變渾濁,,但在顯微鏡下可以觀察到各種形狀的菌絲。像念珠菌和酵母菌則會呈卵圓形散在細胞周邊和細胞之間,。
肉眼觀察特點:真菌污染最短3天才能長出橢圓形的霉斑,。霉斑往往會漂浮在培養(yǎng)液表面,隨著時間逐步擴大,。真菌污染后,,細胞生長變慢,最后由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡,。真菌生長的比較慢,,不那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了,,也很難救活了,。
三、病毒污染
組織細胞培養(yǎng)過程中,,如果沒有除去潛在的病毒,,就會產(chǎn)生病毒污染。目前,,從原代猴腎細胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒,。
盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng),但生產(chǎn)疫苗是不安全的,。因此,,潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題,。
五,、交叉污染
雖然不如微生物污染普遍,,但許多細胞系與HeLa以及其他快速生長細胞系之間的廣泛交叉污染已經(jīng)是一個明確的問題,會產(chǎn)生嚴重的后果,。
在進行多種細胞培養(yǎng)操作時,,所用器具要嚴格區(qū)分。
在進行換液或傳代操作時,,注射器和滴管不要觸及細胞培養(yǎng)瓶瓶口,,以免把細胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細胞。
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