你知道抗體的保存條件都有哪些嗎?讓我們一起來看看吧,!
一,、抗體的穩(wěn)定性
抗體是免疫系統(tǒng)中最重要的分子之一,其穩(wěn)定性是自然進化篩選的結(jié)果,。在眾多物種中,,抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu),分子中70% 氨基酸殘基(免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域)以beta片層(beta-sheet)形式堆疊,,形成緊密并能耐受蛋白酶作用的“三明治"結(jié)構(gòu),,輕鏈和重鏈通過保守的二硫鍵形成具有三個結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白,大大提高了分子本身的穩(wěn)定性,。
抗體主要涉及化學或物理不穩(wěn)定性,。化學不穩(wěn)定性是指多肽或蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)內(nèi)共價鍵的形成或破壞,。蛋白質(zhì)化學失活機制主要包括聚合作用,、重要氨基酸的變化,如肽鍵在稀酸條件下被水解,;半胱氨酸,、色氨酸、甲硫氨酸的氧化,;二硫鍵的還原,;用金屬離子修飾巰基形成硫醇鹽,;天冬酰胺與谷氨酰胺的脫酰胺;氨基酸消旋,,寡聚蛋白解聚成單體等,。而抗體結(jié)構(gòu)的展開、解離,、變性,、聚集和沉淀被稱為構(gòu)象或物理不穩(wěn)定性。
zhong所周知,,儲存條件(pH值,、緩沖液類型、穩(wěn)定劑,、防腐劑,、蛋白酶抑制劑、溫度和反復解凍)在抗體穩(wěn)定性中起著至關重要的作用,。
二,、保存溫度
每種樣品均有其穩(wěn)定的溫度范圍,溫度升高會引起許多物理和化學變化,,如溫度升高10℃,,氧化反應約加快數(shù)倍,酶促反應約增加1-3倍,;又如多數(shù)蛋白在60℃以上開始變性,,熱變性通常是不可逆的,不利于物質(zhì)的穩(wěn)定存在,。另外,,適宜的溫度(如室溫)又是微生物污染的重要條件。而低溫卻可以抑制氧化,、水解等化學反應及微生物生長,,使微生物處于生命遲緩和隱蔽狀態(tài)。故大多數(shù)生化樣品選擇低溫保存,,其穩(wěn)定性可大大增加,。
通常蛋白質(zhì)短期在4℃中儲存穩(wěn)定,不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)應儲存在-20℃,,而極不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)存儲在-70℃,。然而在冷凍過程中會產(chǎn)生大量的小冰晶,形成更大的冰-水界面表面積,,冰-水表面面積的增加與蛋白質(zhì)構(gòu)象的變化和蛋白質(zhì)聚集的增加有關,,因此需要避免反復凍融。
凍干粉抗體,,穩(wěn)定性高,,可在-20℃、-80℃條件中長時間保存(長達數(shù)年),,4℃環(huán)境也較為穩(wěn)定,。權(quán)衡各種因素,凍干粉抗體一般保存在-20℃,,取用方便,,保存時間長。粉末狀抗體溶解后即變成液體狀態(tài)抗體,,保存條件發(fā)生變化,。需要按照說明書或者液體抗體保存方法(最好分裝)。
三,、蛋白質(zhì)保存濃度
通常蛋白質(zhì)的濃度也是影響穩(wěn)定性重要因素,,一般蛋白質(zhì)在高濃度(1 mg/ml或者更高)溶液中比較穩(wěn)定,不容易降解,,因為液態(tài)蛋白質(zhì)容易受水化作用的影響,,保存時濃度不能太低,否則可能引起亞基蛋白和輔助因子解離,,會導致結(jié)構(gòu)松散,,穩(wěn)定性下降而易于失活。
因此部分抗體試劑中加入了牛血清白蛋白(BSA)作為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑來防止降解,。加入BSA能夠抑制冷凍引起的蛋白質(zhì)去折疊,,通過增加蛋白質(zhì)的起始濃度,能夠增強在凍融過程中蛋白質(zhì)制備物對損傷的耐受性,。當?shù)鞍踪|(zhì)的起始濃度增高時,,抗體變性的百分比也會下降。另一方面,,加入的蛋白還能盡可能減少抗體由于管壁吸附所造成的損失,。
當抗體稀釋至工作濃度后,應當及時使用,,在4℃盡量不要超過1天,。
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