離心柱上有硅膠濾膜,，在高鹽低pH條件下，核酸能結(jié)合到硅膠膜上,，而蛋白質(zhì)和其他代謝產(chǎn)物被洗脫,；后續(xù)改變反應(yīng)條件到低鹽高pH來洗脫純化DNA。用離心柱法來提取DNA,，得到的DNA質(zhì)量好,，純度和濃度較高。那么離心柱法提取DNA的實(shí)驗(yàn)步驟與注意事項(xiàng)有哪些呢,？讓我們一起來看看吧,！
一、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 平衡液預(yù)處理
取一個(gè)新的吸附柱放在收集管中,，懸空加入100μL的平衡液至離心柱中,，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液,，將離心柱放回收集管中,，備用。
2. 處理材料
（1）如提取材料為血液,，可直接使用200μL新鮮,、冷凍或加入各種抗凝劑的血液,，不足200μL可加緩沖液1補(bǔ)足,；
（2）貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞和動(dòng)物組織應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液,，然后10000rpm離心1min,，棄上清,，加200μL緩沖液,，振蕩至che底懸??；
3. 加入蛋白酶K,，混勻
（1）提取血液和細(xì)胞基因組時(shí),，只需加入蛋白酶K混勻,，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步,；
（2）提取組織基因組時(shí),，加入蛋白酶K混勻,，需在56℃放置,，直至組織溶解,，12000rpm離心30s以去除管蓋內(nèi)壁的水珠,，再進(jìn)行下一步驟,。
4. 加入200μL緩沖液2,，充分顛倒混勻,，70℃放置10min,，溶液應(yīng)變清亮,，12000rpm離心30s以去除管蓋內(nèi)壁的水珠,。
5. 加入200μL無水乙醇，充分振蕩混勻15s,，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,，12000rpm離心30s以去除管蓋內(nèi)壁的水珠,。
6. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱中（吸附柱放入收集管中）,，12000rpm離心30s，倒掉廢液,，將吸附柱放回收集管中,。
7. 向吸附柱中加入500μL緩沖液3（注意：使用前請(qǐng)確保已加入無水乙醇！），12000rpm離心30s,，倒掉廢液,，將吸附柱放入收集管中。
8. 向吸附柱中加入600μL漂洗液（注意：使用前請(qǐng)確保已加入無水乙醇?。?，離心30s,，倒掉廢液,，將吸附柱放入收集管中。
9. 重復(fù)操作步驟8,。
10. 將吸附柱放回收集管中,，12000rpm離心2min，盡量去除漂洗液,，將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘,，以che底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
11. 將吸附柱轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中,，向吸附膜的中間部位加50~100μL洗脫液,，室溫放置3~5min，12000rpm離心2min,；將得到的溶液重新放回吸附柱中,，室溫放置2分鐘，12000rpm離心2min,，收集DNA溶液,。
12. DNA可以存放在2~8℃，若要長時(shí)間存放,，可以放置在-20℃,。
二、注意事項(xiàng)
1. 所有的離心步驟均在室溫完成,，均使用臺(tái)式離心機(jī),；
2. 使用前確保緩沖液3和漂洗液中預(yù)先加入無水乙醇；
3. 實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆茫?/p>
4. 第10步,，要讓漂洗液揮發(fā)干凈,，否則會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)；
5. 樣品需要避免反復(fù)凍融,，否則會(huì)影響DNA的得率,。
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