qPCR擴(kuò)增過程中，擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時的所對應(yīng)的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)（Cycle Threshold）,。C代表Cycle,，T代表Threshold。簡單講,，Ct值就是qPCR中起始模板擴(kuò)增達(dá)到一定產(chǎn)物量時,，所對應(yīng)的循環(huán)數(shù)。那么你知道qPCR實驗中的Ct值有什么作用嗎,？讓我們一起來看看吧,！
一、指數(shù)擴(kuò)增,、模板量與Ct值的關(guān)系
理想情況下,，qPCR中的基因經(jīng)過一定的循環(huán)數(shù)被指數(shù)擴(kuò)增而積累，擴(kuò)增循環(huán)數(shù)和產(chǎn)物量之間的關(guān)系是：擴(kuò)增產(chǎn)物量=起始模板量×（1+En）循環(huán)個數(shù),。然而qPCR反應(yīng)并不是一直處于理想情況下,，當(dāng)擴(kuò)增產(chǎn)物量達(dá)到“一定產(chǎn)物量"時，此時循環(huán)個數(shù)為Ct值,，處于指數(shù)擴(kuò)增時期,。Ct值與起始模板量的關(guān)系：模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系。起始模板量濃度越高,，Ct值越??；起始模板量濃度越低，Ct值越大,。
二,、擴(kuò)增曲線、熒光閾值與一定產(chǎn)物量
qPCR擴(kuò)增產(chǎn)物量是以熒光信號的形式直接呈現(xiàn),，也就是擴(kuò)增曲線,。在PCR早期，擴(kuò)增處于理想情況下,，循環(huán)數(shù)較少,，產(chǎn)物積累少，產(chǎn)生熒光的水平不能與熒光本底背景明顯地區(qū)別,，之后熒光的產(chǎn)生增加進(jìn)入指數(shù)期,。可以在PCR反應(yīng)剛處于指數(shù)期的某一點(diǎn)上來檢測PCR產(chǎn)物的量,，以此作為“一定產(chǎn)物量",，并且由此來推斷模板最初的含量。因此,，一定產(chǎn)物量對應(yīng)的熒光信號強(qiáng)度,，也就是熒光閾值。
在PCR的后期,，擴(kuò)增曲線不再呈現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增,，進(jìn)入線性期和平臺期。
三,、Ct值的重現(xiàn)性
PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期，此時微小誤差尚未放大,，因此Ct值的重現(xiàn)性極hao,，即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的,。
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