電轉(zhuǎn),，也稱電穿孔法,，是通過脈沖電流在細胞膜上打孔，將外源分子（DNA,、RNA ,、mRNA等）導(dǎo)入真核細胞內(nèi)，來改變細胞的特性,，從而達到改造細胞的目的,，是實現(xiàn)細胞基因功能和蛋白質(zhì)表達研究的重要工具。那么該如何提高電轉(zhuǎn)效率呢,？讓我們一起來看看吧,！
一、細胞收集時：
1)在消化貼壁細胞時,，一定要注意終止胰酶反應(yīng),，防止過度消化,；最好使用專業(yè)的胰酶中和劑,；
2)在進行細胞離心時，使用低轉(zhuǎn)速長時間離心,，提升細胞的存活率,；
3)選擇合適狀態(tài)的細胞，一般原代細胞可以傳1-2次后使用,；盡量挑選迭代次數(shù)少的細胞,，如果是凍存細胞，建議復(fù)蘇1-2h后使用,；
4)選擇對數(shù)增長期的細胞,；
5)做好支原體清除,。
二、試劑添加：
1）電轉(zhuǎn)試劑的添加只需室溫操作即可,；
2）細胞在試劑中停留不超20min,，混合好盡快開始實驗；
3）轉(zhuǎn)染的底物占比不能大于總體積的10%,，比如轉(zhuǎn)染體系100ul,，底物最多添加10ul；
4）在消化的細胞進行配置時,，一定要離心并完quan去除殘留培養(yǎng)基,；
5）在加入到電極杯中時，要避免產(chǎn)生氣泡,，從而影響電脈沖,；
6）對底物進行內(nèi)毒素控制；
7）轉(zhuǎn)染試劑與底物濃度配比控制,；
8）如果是mRNA轉(zhuǎn)染,，可多洗滌2次。
三,、程序設(shè)置：
1）使用電轉(zhuǎn)儀,，程序已經(jīng)設(shè)定好，可以根據(jù)不同的細胞名稱,，選擇對應(yīng)的最you程序,；根據(jù)實際情況，可以對程序進行微調(diào),，確保轉(zhuǎn)染效率和細胞存活率,。
2）使用需要自行設(shè)置的儀器，一般電場強度設(shè)置遵循低電場,、長時程的原則,。
四、細胞重懸：
1）轉(zhuǎn)染結(jié)束之后,，可以先停留10min再加培養(yǎng)基重懸,；
2）使用無鈣培養(yǎng)基重懸，5-10min后轉(zhuǎn)移細胞到培養(yǎng)皿上,；
3）后續(xù)的實驗一般在轉(zhuǎn)染后24h再進行,；
4）電轉(zhuǎn)后的細胞，鋪板數(shù)量翻一倍,。
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