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親和層析填料的應(yīng)用原理及其優(yōu)勢

閱讀:1348      發(fā)布時間:2023-5-8
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親和層析填料是根據(jù)生物分子間親和力具有專一性而設(shè)計的層析技術(shù),,是生物大分子的生物學(xué)特異性,,這種專一性的親和力體現(xiàn)在,激素和受體,、抗原和抗體,、酶蛋白和輔酶酶和酶抑制劑(或配體)等,。以抗原和抗體為例,,在一定條件下,抗原抗體能緊密地結(jié)合在一起形成復(fù)合物,。將復(fù)合物的一方固定在不溶性載體上,,則可從溶液中專一地分離和提純另一方。與其他純化方法相比,,親和層析純化作用強(qiáng),,效果好,最重要的是,,純化速度快,,有時僅一步即可達(dá)到純化的目的。

親和層析填料具有三大優(yōu)點(diǎn):

1.純化步驟少,、純化純度高,。親和層析填料一種極為有效的分離蛋白質(zhì)的方法,通常情況下,,一步法即可達(dá)到純化的目的,,更為關(guān)鍵的是,純化的純度高,。  

2.對不穩(wěn)定蛋白純化更有利,。親和層析填料有效的進(jìn)行物質(zhì)純化,對生物分子吸附和分離具有選擇性,,純化倍數(shù)同時,在純化過程中,,蛋白得到濃縮,,結(jié)合到親和配基后,性質(zhì)更穩(wěn)定,,活性回收率更高,、純化步驟更少、純化時間更短,、對不穩(wěn)定蛋白的純化有利,。

3.分離效果優(yōu)良(較大容量載體同樣)。除特異性的吸附外,,仍然會因分子的錯誤認(rèn)別和分子間非選擇性的作用力而吸附一些雜蛋白質(zhì),,另外在洗脫過程中配體不可避免的脫落進(jìn)入分離體系,。親和層析填料正確地選擇合適的配體和結(jié)合方式,,對獲得具有優(yōu)良分離效果和較大容量的載體同樣具有重要作用。能與分離物質(zhì)牢固,、特異和可逆結(jié)合的物質(zhì)都可以作為配體,。選擇配體有兩個條件:第一是生物大分子與配體間具有合適的親和力,親和力太強(qiáng),,洗脫條件劇烈,,易造成生物大分子失活,親和力太小,,解離容易,,結(jié)合率不高。第二是配體要具有雙重功能,,既有可牢固與載體結(jié)合的基團(tuán),,結(jié)合后又不影響生物大分子與配體間的親和力。


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