簡介
獲得高質量和完整的 RNA 是很多分子生物學實驗中最重要的一步,，當前應用最多的是 Trizol/氯仿萃取的方法。
原理
1,、４℃ 預冷離心機;
2,、取出培養(yǎng)皿，在超凈臺中去除培養(yǎng)基,，按照每 1x107 細胞加入 １ｍL Trizol 試劑,，用槍頭吹打充分裂解細胞;
3,、將細胞裂解液轉移到 1.5 mL 無 RNA 酶的 EP 管中，向每個 EP 管中加入（1/5 Trizol 體積的）200 μL 氯仿,，上下翻轉充分混合后,，室溫靜置 10 分鐘，使核酸蛋白復合物wan全解離;
4,、在 ４℃ 下 12000 g 離心 15 分鐘;
5,、離心后，將上層水相（約 1/2 Trizol體積）小心轉移到一個新的 EP 管,，加入等體積異丙醇,，震蕩后室溫靜置 5-10 分鐘，然后 12000 g 4℃ 離心 15 分鐘,，棄上清保留沉淀;
6,、加入1 mL 75％ 乙醇清洗并沉淀 RNA,，12000 g 離心 10 分鐘;
7,、棄上清，并重復上述操作一次;
8,、棄上清,，在超凈工作臺中打開 EP 管蓋，風干 5-10 分鐘,，不需wan全干燥;
9,、視沉淀的量，加入 10-30 μL RNase-Free 的 DEPC 雙蒸水中;
10,、待沉淀溶解后,，用 nanodrop 測定其濃度和純度并作標記，進行下游實驗,，多余的RNA 保存于 -80℃ 冰箱,。
用途
RT-PCR、分子克隆,、Northern-Blot,、RNA 體外轉錄與翻譯等。
材料與儀器
【材料】：細胞,；Trizol 試劑,；氯仿；異丙醇,；75％ 乙醇（使用 RNase-Free 水配制）,；RNase-Free 水。
【物品及儀器】：1.5 ml EP管（RNA-free）,，大,，中,，小號槍頭（RNA-free），移液器,，渦旋振蕩器,，高速冷凍離心機，超凈工作臺,。
步驟
1,、４℃ 預冷離心機;
2、取出培養(yǎng)皿,，在超凈臺中去除培養(yǎng)基,，按照每 1x107 細胞加入 １ｍL Trizol 試劑，用槍頭吹打充分裂解細胞;
3,、將細胞裂解液轉移到 1.5 mL 無 RNA 酶的 EP 管中,，向每個 EP 管中加入（1/5 Trizol 體積的）200 μL 氯仿，上下翻轉充分混合后,，室溫靜置 10 分鐘,，使核酸蛋白復合物wan全解離;
4、在 ４℃ 下 12000 g 離心 15 分鐘;
5,、離心后,，將上層水相（約 1/2 Trizol體積）小心轉移到一個新的 EP 管，加入等體積異丙醇,，震蕩后室溫靜置 5-10 分鐘,，然后 12000 g 4℃ 離心 15 分鐘，棄上清保留沉淀;
6,、加入1 mL 75％ 乙醇清洗并沉淀 RNA,，12000 g 離心 10 分鐘;
7、棄上清,，并重復上述操作一次;
8,、棄上清，在超凈工作臺中打開 EP 管蓋,，風干 5-10 分鐘,，不需wan全干燥;
9、視沉淀的量,，加入 10-30 μL RNase-Free 的 DEPC 雙蒸水中;
10,、待沉淀溶解后，用 nanodrop 測定其濃度和純度并作標記,，進行下游實驗,，多余的RNA 保存于 -80℃ 冰箱。
注意事項
1、過程中需佩戴口罩和新手套,，對臺面以及周圍環(huán)境進行滅酶處理,，盡量在超凈臺中進行操作,；
2,、使用無 Rnase 的塑料制品和槍頭,，避免交叉污染,。
3、溶液配制應使用無 Rnase 的水,，（將水加入到干凈的玻璃瓶中,，加入 DEPC 至終濃度為 0.1%（V/V),，放置過夜,，高壓滅菌,。注：DEPC 有致癌之嫌，須小心操作）,。
4,、Trizol 裂解液非常危險，因小心避免濺到身上,，臺面上的 Trizol 要及時清理干凈,。
常見問題
RNA 得率過低：
1.使用更有效的破碎/勻漿方法。如液氮搗碎,、酶消化破壁,、電動勻漿器勻漿；
2.更換抽提試劑,；
3.核酸濃度低時，采用低溫沉淀,，并延長沉淀時間,；
4.增加細胞。
RNA 質量不高：
1,、取上層水相時求多,，吸到了下層有機相；
2,、清洗不干凈,。
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