日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

原理

Trizol 是一種新型總 RNA 抽提試劑，采用變性劑即內(nèi)含異硫氰酸胍酚和 β-巰基乙醇等變性物質(zhì),，能迅速破碎細(xì)胞,，抑制細(xì)胞釋放出的核酸酶。異硫氰酸胍屬于解偶劑,，是一類強(qiáng)力的蛋白質(zhì)變性劑,，可溶解蛋白質(zhì)，并使蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)消失,，細(xì)胞結(jié)構(gòu)降解,，核蛋白迅速與核酸分離。β-巰基乙醇主要破壞 RNase 蛋白質(zhì)中的二硫鍵,。細(xì)胞裂解后,，細(xì)胞釋放出蛋白質(zhì)、DNA,、RNA 等物質(zhì),，再根據(jù)它們在不同的 PH 值和不同極性溶劑的溶解度不同而使得分開。

材料與儀器

儀器：細(xì)胞樣品,、TRIzol 試劑、氯仿,、異丙醇,、75% 乙醇、DEPC,、H2O
材料：離心管,、離心機(jī)、EP 管,、勻漿器,、移液管、冰袋,、漩渦振蕩器

步驟

1. 樣品處理：

（1） 培養(yǎng)細(xì)胞：收獲細(xì)胞 1~5 × 107,，移入 1.5 mL 離心管中，加入 1 mL Trizol，混勻,，室溫靜置 5 min,。

（2） 組織：取 50~100 mg 組織（新鮮或 -70 ℃ 及液氮中保存的組織均可）置 1.5 mL 離心管中，加入 1 mL Trizol 充分勻漿,，室溫靜置 5 min,。

2. 加入 0.2 mL 氯仿，振蕩 15 s,，靜置 2 min,。

3. 4 ℃ 離心，12000 g × 15 min,，取上清,。

4. 加入 0.5 mL 異丙醇，將管中液體輕輕混勻,，室溫靜置 10 min,。

5. 4 ℃ 離心，12000 g × 10 min,，棄上清,。

6. 加入 1 mL 75% 乙醇，輕輕洗滌沉淀,。4 ℃,，7500 g × 5 min，棄上清,。

7. 晾干,，加入適量的 DEPC H2O 溶解（65 ℃ 促溶 10~15 min）

注意事項(xiàng)

1. 樣品量和 Trizol 的加入量一定要按步驟（1）的比例，不能隨意增加樣品量或減少 Trizol 量,，否則會(huì)使內(nèi)源性 RNase 的抑制不wan全,，導(dǎo)致 RNA 降解。

2. 實(shí)驗(yàn)過程必須嚴(yán)格防止 RNsae 的污染,。

常見問題

1. RNA 的定量計(jì)算：

RNA 定量方法與 DNA 定量相似,，RNA 在 260 nm 波長處有最大的吸收峰。因此,，可以用 260 nm 波長分光測定 RNA 濃度,，OD 值為 1 相當(dāng)于大約 40 μg/mL 的單鏈 RNA。如用 1 cm 光徑,，用 ddH2O 稀釋 DNA 樣品 n 倍并以 ddH2O 為空白對(duì)照,，根據(jù)此時(shí)讀出的 OD260 值即可計(jì)算出樣品稀釋前的濃度：RNA（mg/mL） = 40 × OD260 讀數(shù) × 稀釋倍數(shù)（n） / 1000。

2. RNA 的純度：
RNA 純品的 OD260/OD280 的比值為 2.0,，故根據(jù) OD260/OD280 的比值可以估計(jì) RNA 的純度,。

天津益元利康生物科技有限公司提供Zymo RNA提取試劑盒,，更多有關(guān)RNA提取實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品和資料，請(qǐng)聯(lián)系益元利康客服,！

提供商	天津益元利康生物科技有限公司	下載次數(shù)	49次
資料大小	13.7KB	資料類型	WORD 文檔 免費(fèi)下載該資料
資料圖片	點(diǎn)擊查看	瀏覽次數(shù)	829次