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教你如何選擇合適的液相色譜柱
在選擇色譜柱之前,,先多了解自己的樣品和雜質(zhì),他們的類型結(jié)構(gòu),、極性,、酸堿性、分子量大小等等,,液相色譜柱決定終分離效果,,所以在選擇色譜柱時候有必要考慮清楚自己的需求。
首先液相色譜柱目前來說分為正反相色譜柱,,正相有SI等,,反相有C18等。正相主要分離極性物質(zhì),,反相主要分離非極性物質(zhì),,氨基柱等主要分離二者之間的。
明確了色譜柱大概功能之后,,確認下自己樣品信息,,基本就有點眉目了,方向?qū)α?,剩下的事情就是細?jié)了如:鍵合相,、粒徑、孔徑、碳載量等
1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測,,即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱
2. 如果樣品極性太強,,或酸性太強;可以選擇CN,NH2,,或硅膠柱,,HILIC(親水色譜),也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱(缺點是離子對試劑平衡時間長,,對流動相pH要求比較精密,,否 則很難重復(fù)實驗,另外離子對試劑很難洗下來,,基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗)
3. 若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質(zhì),,且硅膠端基封尾)或一些經(jīng)過修飾的C18柱(如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等),他們都會減少堿性化合物的拖尾,,一般會選擇中性或偏堿的條件下做,,因為這樣可增加堿性樣品的保留
4.如果堿性化合物的極性太強,或堿性太強;可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(優(yōu)點是方法開發(fā)簡單,,缺點是目前實 現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少,,價格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用,這也是很經(jīng)典的檢測堿性樣品的方法)選擇強離子交換柱(缺點 是不能用來分析其它樣品,,對流動相pH要求比較精密,,否則很難重復(fù)實驗)也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱