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離子色譜法測(cè)定嬰幼兒配方奶粉中的核苷酸
核苷酸是構(gòu)成核酸的成分，堿基與糖通過(guò)糖苷鍵連成核苷，核苷與磷酸以酯鍵連成核苷酸,。目前嬰幼兒配方奶粉中作為添加劑的核苷酸主要有5中：胞嘧啶核苷酸（CMP）、腺嘌呤核苷酸（AMP）、尿嘧啶核苷酸（UMP）,、次黃嘌呤核苷酸（IMP）、鳥(niǎo)嘌呤核苷酸（GMP）,。其主要生理功能是廣泛參與人體的能量代謝,、蛋白質(zhì)合成，具有提高各種酶的活性、活化細(xì)胞功能,、促進(jìn)抗體形成,、增強(qiáng)免疫功能的作用。它們可促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育,，是與“神經(jīng)生長(zhǎng)因子”有關(guān)或者可以作為神經(jīng)生長(zhǎng)物質(zhì)利用的營(yíng)養(yǎng)成分,。一些臨床上的研究發(fā)現(xiàn)，添加核苷酸的嬰兒配方奶粉可減少腹瀉的發(fā)生及促進(jìn)較小胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育,。
牛奶中一般不含有核苷酸,，但由于核苷酸對(duì)嬰幼兒的特殊功效，許多奶制品企業(yè)都把核苷酸作為重要添加劑,。但人體對(duì)核苷酸的需求有一定的限度,，并非越多越好。為此對(duì)嬰幼兒奶粉產(chǎn)品中核苷酸的質(zhì)量監(jiān)控極為重要,，必須盡快研究制定適用于乳制品的檢測(cè)方法,。目前報(bào)道的檢測(cè)方法主要有比色法、離子交換色譜法,、毛細(xì)管電泳法,、液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等,。比色法應(yīng)用較早,，但需要排除干擾、操作繁瑣,。離子交換色譜法,、毛細(xì)管電泳法測(cè)定結(jié)果重現(xiàn)性不佳。液相色譜多用離子對(duì)反相色譜法進(jìn)行測(cè)定,，但離子對(duì)反相色譜法對(duì)胞嘧啶核苷的保留很弱,，且牛奶樣品成分復(fù)雜，測(cè)試過(guò)程中容易產(chǎn)生假陽(yáng)性,；液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法的儀器價(jià)格昂貴,。
離子色譜法是分析無(wú)機(jī)陰、陽(yáng)離子的分離測(cè)試技術(shù),，可以同時(shí)將常見(jiàn)陰離子,、有機(jī)酸進(jìn)行分離，具有簡(jiǎn)單,、快速,、靈敏度高等特點(diǎn)。而核苷酸在水溶液中離解為離子態(tài),，因此可以采用IC進(jìn)行測(cè)定,。近年來(lái)，采用IC分析生物分子的應(yīng)用研究漸有報(bào)道，但涉及嬰兒奶粉中5種核苷酸的研究還未見(jiàn)報(bào)道,。為此,，本文建立了運(yùn)用IC同時(shí)測(cè)定嬰兒奶粉中5中核苷酸的方法。
儀器準(zhǔn)備
儀器簡(jiǎn)介
IC-700型離子色譜儀采用與WATERS液相相同的并聯(lián)泵輸液方式,，工作耐壓值高,，脈動(dòng)小、穩(wěn)定可靠,。進(jìn)樣器與整機(jī)分體式模式,，具有良好的抗干擾性和可拓展性。接頭,、流路均使用進(jìn)口Peek材料,，耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿。連續(xù)自動(dòng)再生電化學(xué)抑制器,，抑制容量高,。高分辨率觸摸屏配有WinCE操作系統(tǒng)，以及全中/英文顯示的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),。
樣品處理：
準(zhǔn)確稱取奶粉樣品4.0g,，加入20mL水（水溫75℃），振蕩超聲使其溶解均勻,，放冷,，加入3.0mL5%（體積分?jǐn)?shù)，下同）乙酸,，混勻,，沉淀蛋白質(zhì)；加水定容至50mL,，離心,，取上清液,、經(jīng)反相C18預(yù)處理小柱與0.22μm濾膜過(guò)濾后,，濾液供IC分析。
色譜條件：
色譜柱 | IonPac AG16保護(hù)柱,，IonPac AS16分離柱 |
流動(dòng)相 | KOH溶液,，梯度淋洗，梯度洗脫程序：0-12min,，12mmol/L;12-22min,，由12mmol/L線性增加至55mmol/L；22-28min,，55mmol/L;28-28.10min,，由55mmol/L線性降低至12mmol/L；28.1-33min，12mmol/L,，恢復(fù)至平衡狀態(tài),，流速1.0ml/min |
檢測(cè)波長(zhǎng) | 260nm |
柱溫 | 25℃ |
進(jìn)樣量 | 25μl |
測(cè)定結(jié)果
