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分光光度計(jì)分析檢測(cè)家蠶絡(luò)氨酸羥化酶的活性

閱讀：1086 發(fā)布時(shí)間：2017-9-26

分光光度計(jì)分析檢測(cè)家蠶絡(luò)氨酸羥化酶的活性

絡(luò)氨酸羥化在多巴胺的合成體系中限速步驟,，氧化絡(luò)氨酸為左旋多巴，并進(jìn)一步氧化為多巴胺,。目前檢測(cè)絡(luò)氨酸羥化酶活性的分析方法很多,，包括放射性同位素化學(xué)法,、液相色譜法分析L-dopa的生成、二氧化碳碳十四的捕獲,。這些檢測(cè)絡(luò)氨酸羥化酶活性的方法都是可行的選擇,，但是這些檢測(cè)方法具有相當(dāng)大的缺點(diǎn)。首先,，這些方法是耗時(shí)的，例如液相色譜法分析需要平均每20min采1次樣,，導(dǎo)致試驗(yàn)和數(shù)據(jù)分析之間相當(dāng)大的時(shí)間間隔,。其次，常見絡(luò)氨酸羥化酶活性的檢測(cè)方法為放射性標(biāo)記法,，這些放射性的物質(zhì)需要隔離,，需要購買昂貴的化學(xué)藥品，并且涉及特殊的處理,。如氚釋放實(shí)驗(yàn)要求廣泛地繁瑣后期監(jiān)測(cè)工作,，從反應(yīng)混合物中分離氚化水；而另一種方法必須捕獲二氧化碳碳十四,，并且檢測(cè)碳十四,。這2種檢測(cè)方法都是耗時(shí)而緩慢的，并涉及液體閃爍計(jì)數(shù),。其次,，這些方法中測(cè)定每一個(gè)產(chǎn)物的形成發(fā)生在固定的時(shí)間點(diǎn)，不能實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)絡(luò)氨酸羥化酶活性,。本研究采用基因重組家蠶絡(luò)氨酸羥化酶開發(fā)一種新的是是檢測(cè)方法,，通過分光光度法監(jiān)測(cè)產(chǎn)生的L-dopa用以測(cè)量BmTH活性，用高碘酸鈉氧化L-dopa產(chǎn)生多巴色素,，其在475nm處有峰值,。該方法簡(jiǎn)潔、靈敏,、迅速,，且對(duì)身體沒有輻射，方便推廣使用,，并可用于體內(nèi),、體外TH活性的檢測(cè)。

儀器準(zhǔn)備