• 紫外-可見(jiàn)分光光度法：紫外-可見(jiàn)分光光度法是在190～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測(cè)定的方法,。當(dāng)光穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí),，物質(zhì)對(duì)光的吸收程度隨光的波長(zhǎng)不同而變化。

• 鉬銻抗比色法：在一定酸度和銻離子存在的情況下,，磷酸根與鉬酸銨形成銻磷鉬混合雜多酸,，它在常溫下可迅速被抗壞血酸還原為鉬藍(lán)，在700nm波長(zhǎng)下測(cè)定,。

離心管（10ml,、25ml）、坩堝,、燒杯,、容量瓶、移液槍,、分析天秤,、pH計(jì)、振蕩器,、烘箱,、高速離心機(jī)、紫外分光光度計(jì),、高壓滅菌鍋,、馬弗爐

使用桿持式淺水型柱狀底泥采樣器采取湖泊表層濕泥回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行磷形態(tài)分析。

1,、將坩堝編號(hào)并稱重記錄,，取濕泥放入坩堝中，稱量濕泥與坩堝的總重量,，放入烘箱60℃烘干,，再次記錄其總重量，得出底泥含水率,。

2,、將烘干的泥研磨后過(guò)100目篩，裝入編號(hào)4號(hào)自封袋中,。

3,、取50ml離心管并編號(hào)，取過(guò)篩后樣品各0.4g放入離心管中,，加入20ml 1 mol/L NH4Cl溶液（溶液1），放入搖床振蕩2h,，用高速離心機(jī)3800r離心15min,，取上清液過(guò)濾后測(cè)得弱結(jié)合態(tài)磷（LP），不用稀釋,；（每步過(guò)后的提取液需要調(diào)節(jié)ph在6-8的范圍,，ph過(guò)低,，值會(huì)偏低甚至測(cè)不出來(lái)，ph高值會(huì)偏太大,。）

4,、在離心管中加入20mL純水，振蕩30min后3900r離心15min去除上清液,，再加入20ml Na₂S₂O₄-NaHCO₃混合溶液（溶液2）,，振蕩30min，3900r離心15min取上清液過(guò)濾,，測(cè)鐵結(jié)合態(tài)磷（Fe-P）,，稀釋倍數(shù)5~10倍；（溶液有臭雞蛋味,，為反應(yīng)正常,，沒(méi)有則要注意。沉淀過(guò)夜后,，若上層有白色或者黃色懸浮物,，需過(guò)濾完了在進(jìn)行測(cè)定,。）

5,、在離心管中加入20mL純水,，振蕩30min后8000r離心5min去除上清液,，再加入0.1 mol/L NaOH溶液（溶液3）20ml,，振蕩16h后3900r離心15min,，取上清液過(guò)濾,，稀釋倍數(shù)0~5倍,，直接測(cè)鋁結(jié)合態(tài)磷（Al-P）,；取50ml比色管并貼標(biāo)簽編號(hào),，取上清液（稀釋倍數(shù)要和鋁結(jié)合態(tài)磷要一致），用純水稀釋至25ml標(biāo)線處,，加入25ml氧化劑（溶液4）放入高壓滅菌鍋,，120℃下滅菌30min后，測(cè)得總磷（TP）,；有機(jī)磷（OP）含量是TP與Al-P差值,，總磷的稀釋倍數(shù)要根據(jù)總體積50mL來(lái)反推所用的樣品；

6,、在離心管中加入20mL純水,，振蕩30min后3900r離心15min去除上清液，再加入0.5 mol/L HCl溶液（溶液5）20ml,，振蕩16h后3900r離心15min,，取上清液過(guò)濾，上清液稀釋5~10倍后，直接測(cè)鈣結(jié)合態(tài)磷（Ca-P）,；

7,、在離心管中加入20mL去離子水，振蕩30min后3900r離心15min去除上清液,，放入烘箱70℃烘干至脫離離心管壁（至少一天一夜）,，全部倒入編好號(hào)的坩堝中放入馬弗爐（坩堝的標(biāo)簽用橡皮擦掉，用鉛筆寫(xiě)）,，550℃燒結(jié)2h（馬弗爐有一定的升溫時(shí)間,，3h后手動(dòng)關(guān)掉，開(kāi)門降溫2h以上取出,，避免燙傷）,；樣品再次放回離心管中，如果燒過(guò)的樣品有結(jié)塊,，用藥匙搗碎,，加入1 mol/L HCl溶液（溶液6）20ml，振蕩16h后3900r離心15min,，取上清液過(guò)濾,，比色時(shí)加入同體積1mol/L NaOH至pH=7（同體積是與加入的不稀釋的樣品同體積），測(cè)得殘?jiān)鼞B(tài)磷（Res-P）,，稀釋5~10倍,。

8、將上述所有需要比色的溶液取3ml,，加入0.3ml鉬銻抗顯色劑（溶液7）振蕩均勻,，顯色40min后在紫外分光光度計(jì)比色；

注：紫外分光光度計(jì)比色過(guò)程：打開(kāi)UV.2.52軟件,，再打開(kāi)紫外分光光度計(jì),，進(jìn)行連接儀器，打開(kāi)總磷或者磷酸根標(biāo)曲,，將兩個(gè)比色皿洗凈加入去離子水放入比色槽,，進(jìn)行自動(dòng)較零后，開(kāi)始樣品比色,。

將測(cè)得數(shù)據(jù)導(dǎo)入EXCEL中,，定量計(jì)算出各形態(tài)磷含量并整理出具報(bào)告。

數(shù)據(jù)導(dǎo)入

計(jì)算公式如下：

式中：

w-土壤中總磷的含量,；A-試料的吸光度值,；A0-空白試驗(yàn)的吸光度值；a-校準(zhǔn)曲線的截距,；V₁-試樣定容體積,；b-校準(zhǔn)曲線的斜率,；m-試樣量；V₂-試料體積,；W_dm-土壤干物質(zhì)的量。