臨床醫(yī)學
鈣成像分析
鈣成像的原理
鈣成像的失敗事例及對策
鈣成像的觀察事例
什么是G CaMP,?
近年來,使用熒光顯微鏡進行鈣成像(Ca成像)拍攝的研究者正在不斷增加,。
鈣成像是一種測量鈣在細胞內的流動情況,,對活動中的神經(jīng)元鈣信號進行直接觀察的方法。被廣泛運用在腦細胞研究等領域,。
大家都知道,,對生活在陸地上的脊椎動物而言,鈣是一種非常重要的成分,。在用于攝食各類動植物的堅固牙齒中,,鈣也是很重要的構成物質。還與激素及神經(jīng)遞質的分泌,、肌肉的收縮,、神經(jīng)細胞的可塑性變化等,生物體內的眾多生命現(xiàn)象息息相關,。利用鈣成像技術,,觀察在生物體內活動的神經(jīng)細胞內鈣離子濃度,,可以對有鈣離子參與的細胞活動進行詳細的觀測。
進行鈣成像時,,需要借助熒光顯微鏡或熒光平板分析儀進行觀察,。將一旦與鈣離子結合,就會改變熒光強度的蛋白質或鈣熒光指示劑導入細胞內部,,根據(jù)熒光強度的變化,,檢測鈣離子的濃度變化。
但是,,由于鈣熒光指示劑的熒光效果非常微弱,,觀察時必須輔以大功率的激光照射,可能會導致細胞死亡,。因此,,在絕大多數(shù)人眼中,順利完成鈣成像并非易事,。
鈣成像的失敗事例,,其實類似于熒光顯微鏡活細胞成像的失敗事例,細胞衰弱,、焦點模糊,、細胞逃離視野,這些都屬于常見的失敗事例,。
例如,,如果對鈣成像開始一段時間后的細胞狀況進行觀察,可能會發(fā)現(xiàn)細胞衰弱甚至死亡的現(xiàn)象,。
其中的重要原因之一,,就是高強度的激發(fā)光對細胞造成了損傷(光毒性)。
解決這一問題的對策如下所示,。
請盡可能使用靈敏度高的相機
請并用增益或Binning
請采用能夠感知微弱熒光的設定
請盡量調弱激發(fā)光
不進行拍攝時請切斷激發(fā)光
在進行鈣成像的過程中,,有時還會發(fā)生焦點從中途就模糊的現(xiàn)象。這可能是因為溫度漂移導致細胞移動,,設定出錯,,抑或是細胞在分裂過程中上下移動,致使焦點偏移,。許多實施熒光顯微鏡觀察的研究者都經(jīng)歷過這樣的情況,。
作為對策,可以使用自動對焦功能或Z棧功能,,預防焦點偏移的發(fā)生,。
如果引進一體化熒光顯微成像系統(tǒng)BZ-X800
無需暗室,、操作簡單,,可非常清晰地進行顯微鏡觀察,。
利用由制冷相機和專用鏡頭構成的高靈敏度光學系統(tǒng),,能夠在盡量減少細胞損傷的同時,獲取高精細的熒光圖像,。
能夠一次性對多個標本進行延時拍攝,,便于開展相同條件下的比較檢驗。
一種由蛋白質構成的鈣傳感器,。
運用基因工程技術,用綠色熒光蛋白,、鈣調素,、肌球蛋白輕鏈片段拼接而成的鈣傳感器蛋白質??梢灾踩牖?,使之與動物模型的組織、細胞特異性啟動子結合,,起到僅對目標組織或細胞瘤實施鈣成像處理的目的,。
熒光顯微成像系統(tǒng) 產(chǎn)品目錄
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