鈣成像分析

近年來，使用熒光顯微鏡進(jìn)行鈣成像（Ca成像）拍攝的研究者正在不斷增加,。
鈣成像是一種測量鈣在細(xì)胞內(nèi)的流動情況,，對活動中的神經(jīng)元鈣信號進(jìn)行直接觀察的方法。被廣泛運(yùn)用在腦細(xì)胞研究等領(lǐng)域,。

大家都知道,，對生活在陸地上的脊椎動物而言，鈣是一種非常重要的成分,。在用于攝食各類動植物的堅(jiān)固牙齒中,，鈣也是很重要的構(gòu)成物質(zhì)。還與激素及神經(jīng)遞質(zhì)的分泌,、肌肉的收縮,、神經(jīng)細(xì)胞的可塑性變化等，生物體內(nèi)的眾多生命現(xiàn)象息息相關(guān),。利用鈣成像技術(shù)，觀察在生物體內(nèi)活動的神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度,，可以對有鈣離子參與的細(xì)胞活動進(jìn)行詳細(xì)的觀測,。

鈣成像的原理

進(jìn)行鈣成像時(shí),，需要借助熒光顯微鏡或熒光平板分析儀進(jìn)行觀察。將一旦與鈣離子結(jié)合,，就會改變熒光強(qiáng)度的蛋白質(zhì)或鈣熒光指示劑導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)部,，根據(jù)熒光強(qiáng)度的變化，檢測鈣離子的濃度變化,。
但是,，由于鈣熒光指示劑的熒光效果非常微弱，觀察時(shí)必須輔以大功率的激光照射,，可能會導(dǎo)致細(xì)胞死亡,。因此，在絕大多數(shù)人眼中,，順利完成鈣成像并非易事,。

鈣成像的失敗事例及對策

鈣成像的失敗事例，其實(shí)類似于熒光顯微鏡活細(xì)胞成像的失敗事例,，細(xì)胞衰弱,、焦點(diǎn)模糊、細(xì)胞逃離視野,，這些都屬于常見的失敗事例,。

例如，如果對鈣成像開始一段時(shí)間后的細(xì)胞狀況進(jìn)行觀察,，可能會發(fā)現(xiàn)細(xì)胞衰弱甚至死亡的現(xiàn)象,。
其中的重要原因之一，就是高強(qiáng)度的激發(fā)光對細(xì)胞造成了損傷（光毒性）,。
解決這一問題的對策如下所示,。

• 請盡可能使用靈敏度高的相機(jī)

• 請并用增益或Binning

• 請采用能夠感知微弱熒光的設(shè)定

• 請盡量調(diào)弱激發(fā)光

• 不進(jìn)行拍攝時(shí)請切斷激發(fā)光

在進(jìn)行鈣成像的過程中，有時(shí)還會發(fā)生焦點(diǎn)從中途就模糊的現(xiàn)象,。這可能是因?yàn)闇囟绕茖?dǎo)致細(xì)胞移動,，設(shè)定出錯，抑或是細(xì)胞在分裂過程中上下移動,，致使焦點(diǎn)偏移,。許多實(shí)施熒光顯微鏡觀察的研究者都經(jīng)歷過這樣的情況。
作為對策,，可以使用自動對焦功能或Z棧功能,，預(yù)防焦點(diǎn)偏移的發(fā)生。

鈣成像的觀察事例

什么是G CaMP,？

一種由蛋白質(zhì)構(gòu)成的鈣傳感器,。
運(yùn)用基因工程技術(shù)，用綠色熒光蛋白,、鈣調(diào)素,、肌球蛋白輕鏈片段拼接而成的鈣傳感器蛋白質(zhì)?？梢灾踩牖?，使之與動物模型的組織、細(xì)胞特異性啟動子結(jié)合,，起到僅對目標(biāo)組織或細(xì)胞瘤實(shí)施鈣成像處理的目的,。